Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- للبدء، ابدأ بتجفيف وتجفيف عينة ثابتة للحد من تشويه العينة الناجم عن إزالة الغازات والمياه السائلة في الضغط التشغيلي المنخفض للمجاهر الإلكترونية المسح التقليدية، SEMs.
لتجفيف العينة، اغسلها بتركيزات متزايدة من الإيثانول في الماء حتى يتم الوصول إلى الإيثانول بنسبة 100٪. ثم كرر هذه العملية مع عامل تجفيف كيميائي في الإيثانول حتى يتم غسل العينة بعامل تجفيف نقي. نقل العينة وعامل التجفيف إلى طبق متبخر.
بعد ذلك ، قم بتركيب العينة المعدة على الجزء العلوي من كعب المجهر باستخدام شريط لاصق كربوني.
في هذه التجربة ، يتم إعداد ذباب الفاكهة ، Drosophila melanogaster ، لتحليل SEM باستخدام عامل التجفيف HMDS.
- لإعداد Drosophila melanogaster، قم بغمر الذباب المخدر في ملليلتر واحد من التثبيت لمدة ساعتين عند 4 درجات مئوية، مع التأكد من غمرها بالكامل.
استخدم ماصة زجاجية لإزالة المثبت. اغسل عينة Drosophila الثابتة في أنبوب طرد دقيق سعة 1.5 ملليلتر ثلاث مرات مع ملليلتر واحد من 0.1 درجة الحموضة العازلة فوسفات المولر 7.2 في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. استخدم ماصة زجاجية لإزالة كل غسلة، مع الحرص على عدم إزالة العينة.
ثم يجفف العينة في أنبوب ميكروفوج، بحجم 1 ملليلتر، باستخدام سلسلة إيثانول متدرج لمدة 10 دقائق لكل منهما. استخدم ماصة زجاجية لإزالة كل غسيل، مع الحرص على عدم إزالة العينة.
لإجراء التجفيف الكيميائي للذباب باستخدام HMDS ، أولا ، استبدل محلول الإيثانول بنسبة 100٪ بمحلول 1 إلى 2 من HMDS والإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 20 دقيقة. ثم استبدل الحل بمحلول 2 إلى 1 من HMDS والإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 20 دقيقة.
نقل العينة، التي هي في أنبوب 1.5 ملليلتر من أجهزة الطرد المركزي الدقيق وHMDS، في طبق وزن الألومنيوم المتاح. استبدل HMDS بنسبة 100٪ بما يكفي من HMDS الطازجة بنسبة 100٪ لتغطية العينة. ضع العينة داخل طبق الألومنيوم مباشرة في غطاء أبخرة كيميائية لتجف بغطاء فضفاض ، مثل صندوق ، لمنع الحطام من السقوط على العينة ، والسماح لها بالجفاف لمدة 12 إلى 24 ساعة.
لتركيب تسمية Drosophila الجزء السفلي من كعب الألومنيوم المتصاعد. استخدم ملاقط دقيقة لوضع الذباب المجفف في الموضع المطلوب على علامة تبويب لاصقة كربونية مؤمنة إلى أعلى كعب تحت مجهر تشريح.
استخدم مسواك لربط الطلاء الفضي بالذباب، وضمان الموصلية، والتأكد من أن الطلاء لا يلمس منطقة التصوير المطلوبة.
