Kimyasal Kurutma: Tarama Elektron Mikroskopisi (SEM) için Biyolojik Numune Hazırlama

- Başlamak için, geleneksel taramalı elektron mikroskoplarının, KOBİ'lerin azaltılmış çalışma basıncında gazların ve sıvı suyun uzaklaştırılmasından kaynaklanan numune bozulmasını azaltmak için sabit bir numuneyi susuz bırakarak ve kurutarak başlayın.

Numuneyi susuz bırakmak için, % 100 etanol ulaşana kadar suda artan etanol konsantrasyonlarıyla yıkayın. Daha sonra numune saf kurutma maddesi ile yıkanana kadar bu işlemi etanolde kimyasal bir kurutma maddesi ile tekrarlayın. Numuneyi ve kurutma maddesini buharlaşan bir kaba aktarın. Minimum ek kurutma maddesi ile örtün ve bir gecede duman kaputunda kurumaya bırakın.

Daha sonra, hazırlanan numuneyi karbon yapışkan bant kullanarak bir mikroskop saplamanın üstüne monte edin. Son olarak, istenmeyen görüntü yapıtlarına neden olabilecek fazla elektronların birikmesini azaltmak için koçanın kenarlarına, ardından saplamanın kenarından örneklerin her birine gümüş boya uygulayın.

Bu deneyde, meyve sinekleri, Drosophila melanogaster, kurutma maddesi HMDS kullanılarak SEM analizi için hazırlanır.

- Drosophila melanogaster hazırlamak için, uyuşturulmış sinekleri 4 santigrat derecede 2 saat boyunca 1 mililitre sabitleyiciye daldırarak tamamen su altında kaldıklarından emin olun.

Sabitleyiciyi çıkarmak için bir cam pipet kullanın. Sabit Drosophila örneğini 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde oda sıcaklığında 1 mililitre 0,1 molar fosfat tampon pH 7,2 ile üç kez yıkayın.

Daha sonra numuneyi bir mikroyakıt tüpünde, 1 mililitre hacimde, her biri 10 dakika boyunca dereceli bir etanol serisi kullanarak susuz bırakın. Her yıkamayı çıkarmak için bir cam pipet kullanın, numuneyi çıkarmamaya dikkat edin. Numuneyi örtmek için yeterli% 100 etanol ile 1,5 mililitre mikrosantrifüj tüpünde saklayın.

HMDS kullanarak sineklerin kimyasal kurutmasını yapmak, ilk olarak,% 100 etanol çözeltisini 1 ila 2 HMDS çözeltisi ve 20 dakika boyunca% 100 etanol ile değiştirin. Ardından çözeltiyi 2 ila 1 HMDS çözeltisi ve 20 dakika boyunca% 100 Etanol ile değiştirin.

1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpü ve HMDS'de bulunan numuneyi aktarın, tek kullanımlık bir alüminyum tartım kabına. %100 HMDS'yi numuneyi kaplayacak kadar taze %100 HMDS ile değiştirin. Numuneyi, numunenin üzerine döküntü düşmesini önlemek için kutu gibi gevşek bir kapakla kuruması için doğrudan kimyasal bir duman kaputuna yerleştirin ve 12 ila 24 saat kurumasını bekleyin.

Drosophila etiketini alüminyum montaj saplama saplamanın altına monte etmek için. Kurutulmuş sinekleri, bir parçalama mikroskobu altında bir saplamanın üstüne sabitlenmiş bir karbon yapıştırıcı sekmesine istediğiniz konuma yerleştirmek için hassas cımbız kullanın.

Gümüş boyayı sineklere bağlamak için bir kürdan kullanın, iletkenliği sağlayın, boyanın istenen görüntüleme alanına temas etmediğinden emin olun. Koçanları bir saplama tutucu kutusuna yerleştirin. Ve ardından açık saplama tutucu kutusunu bir kurutucuya yerleştirin ve gümüş boyanın en az üç saat kurumasını bekleyin.