Encyclopedia of Experiments: Biology
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- पैराफिन एम्बेडिंग के लिए मक्खियों को स्थिर करने के लिए, फ्लाई कॉलर के अंतराल के माध्यम से एनेस्थेटाइज्ड ड्रोसोफिला को सावधानीपूर्वक धक्का दें ताकि उनके सिर समान रूप से डिवाइस के शीर्ष पर तैनात हों, जबकि अभी भी शरीर के बाकी हिस्सों से जुड़े हुए हैं। ऊतक निर्धारण के लिए, कॉलर को कार्नॉय के समाधान में रखें। Carnoy एक डीनाैचरिंग फिक्सेशन एजेंट है जिसमें इथेनॉल, क्लोरीनो, और ऐस्टिक एसिड शामिल हैं।
पैराफिन घुसपैठ के लिए नमूना तैयार करने के लिए, इथेनॉल की ग्रेडेड सांद्रता के माध्यम से कॉलर को स्थानांतरित करके ऊतक को निर्जलित करें। इसके बाद, कॉलर को एक कार्बनिक सॉल्वेंट मिथाइल बेंजोएट में स्थानांतरित करें। इसके बाद, इसे एक मिथाइल बेनोजोएट और पिघले हुए पैराफिन समाधान में रखें, जबकि यह सुनिश्चित करने के लिए गर्म किया गया कि पैराफिन पिघला हुआ रहता है। मेथाइल बेंजोनेट को हटाने के लिए अकेले प्री-गर्म पैराफिन के साथ धोने के कदमों की एक विस्तृत श्रृंखला में आगे बढ़ें।
इसके बाद, कॉलर को एक मोल्ड में तेजी से रखें और इसे पूरी तरह से ढकने के लिए पिघला हुआ पैराफिन डालें। एक बार पैराफिन कठोर हो जाने के बाद, मोल्ड से ब्लॉक को हटा दें और अतिरिक्त पैराफिन को ट्रिम करने के लिए एक रेजर ब्लेड का उपयोग करें। पैराफिन ब्लॉक में एम्बेडेड सिर की पंक्ति को छोड़कर कॉलर को तोड़ें । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम न्यूरोडीजेनेरेटिव फेनोटाइप के विश्लेषण के लिए प्रदर्शित प्रक्रिया देखेंगे ।
- शुरू करने के लिए, सबसे पहले, नाक से उड़ने वाले विषय को कॉलर में धागा करने के लिए संदंश का उपयोग करें। सभी सिरों को एक ही अभिविन्यास में संरेखित करें और सुनिश्चित करें कि सिर या आंखों को कोई नुकसान न हो। यादृच्छिक ज्ञात पदों पर आंखों के लीन ऑलिस मक्खियों को शामिल करें ताकि मक्खियों के क्रम को अनुभागों में आसानी से पहचाना जा सके। इसके अतिरिक्त, यदि ब्याज की मक्खी तनाव में हल्की या सफेद आंखें होती हैं, तो पट्टी के साथ अंतराल पर धागा लाल आंखों वाली मक्खियों को पर्याप्त रूप से सुनिश्चित करने के लिए पट्टी के साथ अंतराल पर लाल आंखों वाली मक्खियों को सुनिश्चित करना सुनिश्चित करता है।
एक से अधिक उपयोग किए जाने पर कॉलर नंबर के साथ मक्खियों के क्रम को रिकॉर्ड करें। एक बार कॉलर समाप्त हो जाने के बाद, इसे 3.5 से 4 घंटे के लिए कार्नॉय के समाधान में रखें। एम्बेडिंग के लिए फ्लाई टिश्यू तैयार करने के लिए इथेनॉल, मिथाइल बेंजोएट और पैराफिन वॉश की एक श्रृंखला करें। इसके बाद, कॉलर को रबर आइस क्यूब ट्रे में प्रति सेक्शन रखें।
धीरे-धीरे हवा के बुलबुले से बचने वाले कॉलर के ऊपर पिघला हुआ पैराफिन डालें और इसे रात भर कठोर होने दें। ट्रे से कॉलर युक्त पैराफिन ब्लॉक को हटा दें। पैराफिन ब्लॉक को रेजर ब्लेड का उपयोग करके कॉलर से अलग करें, धीरे-धीरे कॉलर को तोड़ें। शव कॉलर में रहेगा जबकि सिर पैराफिन ब्लॉक में रहेगा।