Встраивание взрослых Drosophila головы в Парафин: Подготовка ткани для гистологии

- Для обездвиживания мух для встраивания парафина, тщательно нажмите анестезированной Drosophila через щель ошейник мухи, чтобы их головы равномерно расположены на верхней части устройства в то же время прилагается к остальной части тела. Для фиксации тканей, место воротники в растворе Carnoy.Carnoy является денатурации фиксации агент, состоящий из этанола, хлороформа, и уксусной кислоты.

Чтобы подготовить образец для фильтрации парафина, обезвоживает ткань, передавая ошейник через градуированные концентрации этанола. Затем перенесите воротник на метил бензоат, органический растворитель. Далее поместите его в метил-бенозоат и расплавленный парафиновый раствор при нагревании, чтобы парафин оставался расплавленным.

Далее, быстро поместите воротник в форму и залить расплавленным парафином, чтобы покрыть его полностью. После того, как парафин затвердел, удалить блок из формы и использовать лезвие бритвы, чтобы обрезать избыток парафина. Перерыв воротник оставив ряд встроенных голов в парафин блока. В примере протокола, мы увидим процедуру, продемонстрированные для анализа нейродегенеративных фенотипов.

- Для начала используйте миппы, чтобы нить субъекта летит по шее в воротники. Выровнять все головы в той же ориентации и обеспечить никаких повреждений происходит с головой или глазами. Включите безглазый синус oculis мух на случайных известных позиций, так что порядок мух можно легко определить в разделах. Кроме того, если муха штамм интереса имеет светлые или белые глаза, нить красноглазые мухи с интервалами.

Запись порядка мух вместе с номером воротника, если более одного используется.Как только воротник закончен, поместите его в раствор Carnoy в течение 3,5 до 4 часов. Выполните ряд этанола, метил бензоата и парафина моет, чтобы подготовить ткань мухи для встраивания. Далее, поместите воротники в резиновый лоток кубик льда по одному на секцию.

Аккуратно залить расплавленный парафин над воротниками, избегая пузырьков воздуха и дать ему затвердеть на ночь. Удалите парафиновые блоки, содержащие воротники из лотка. Отделите парафиновый блок от воротника с помощью лезвия бритвы, аккуратно оторвав воротник. Тела останутся в воротнике, в то время как головы останутся в парафиновом блоке.