Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Parafin gömme için sinekleri hareketsiz hale getirmek için, uyuşturulmuş Drosophila'yı bir sinek tasmasının boşluğundan dikkatlice itin, böylece kafaları hala vücudun geri kalanına bağlıyken cihazın üzerine düzgün bir şekilde yerleştirilir. Doku fiksasyonu için, yakaları Carnoy'un çözeltisine yerleştirin. Carnoy's etanol, kloroform ve asetik asitten oluşan bir denatüre fiksasyon ajanıdır.
Numuneyi parafin infiltrasyona hazırlamak için, yakayı dereceli etanol konsantrasyonlarından geçirerek dokuyu susuz bırakın. Daha sonra, yakayı organik bir çözücü olan metil benzoat'a aktarın. Sonra, parafin erimesini sağlamak için ısıtılırken metil bir benozoat ve eritilmiş parafin çözeltisine yerleştirin. Metil benzoatı çıkarmak için önceden ısıtılmış parafin ile ayrıntılı bir dizi yıkama adımına geçin.
Daha sonra, yakayı hızla bir kalıba yerleştirin ve tamamen örtmek için erimiş parafin dökün. Parafin sertleştikten sonra, bloğu kalıptan çıkarın ve fazla parafin kesmek için bir jilet kullanın. Parafin bloğunda gömülü kafalar sırasını bırakarak yakayı kesin. Örnek protokolde, nörodejeneratif fenotiplerin analizi için gösterilen prosedürü göreceğiz.
- Başlamak için, ilk olarak, öznenin boynundan yakalara uçması için asalar kullanın. Tüm kafaları aynı yönde hizalayın ve kafaya veya gözlere herhangi bir hasar gelmemesini sağlayın. Gözsüz sinüs oculis sineklerini rastgele bilinen pozisyonlara dahil edin, böylece sineklerin sırası bölümlerde kolayca tanımlanabilir. Ayrıca, ilgi çekici sinek suşu açık veya beyaz gözlere sahipse, kaymayı lekeleyen yeterli pigmentin mevcut olduğundan emin olmak için şerit boyunca aralıklarla iplik kırmızı gözlü sinekler.
Birden fazla kullanılıyorsa sineklerin sırasını yaka numarasıyla birlikte kaydedin. Bir yaka bittikten sonra, 3,5 ila 4 saat boyunca Carnoy'un çözeltisine yerleştirin. Sinek dokusunu gömmeye hazırlamak için bir dizi etanol, metil benzoat ve parafin yıkaması gerçekleştirin.
Hava kabarcıklarından kaçınarak yakaların üzerine erimiş parafin dökün ve bir gecede sertleşmesine izin verin. Yakaları içeren parafin bloklarını tepsiden çıkarın.. Parafin bloğunu jilet kullanarak yakadan ayırın, tasmayı hafifçe koparın. Kafalar parafin bloğunda kalırken vücutlar yakada kalacaktır.
