Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- إعداد إبر الحقن مدبب عن طريق سحب الشعيرات الدموية الزجاج رقيقة الجدران باستخدام سحب إبرة. أمسك بإبرة تحت المجهر وكسر الطرف، وتأكد من أن الفتحة كبيرة بما يكفي لاختراق كتل ذبابة الكبار دون جرحها أكثر من اللازم. الإعدادات وفقا لذلك.
قم بتحميل الإبرة بمحلول الحقن الخاص بك وحملها على فوهة حقن.
- بعد سحب الشعيرات الدموية الزجاج رقيقة الجدران مع سحب إبرة، استخدام ميكرومتر لعقد الإبرة تحت المجهر واستخدام عدد خمسة ملاقط الفولاذ المقاوم للصدأ نقطة دقيقة لكسر غيض إلى قطر تلميح 100 ميكرومتر. لقياس حجم السائل الذي سيتم حقنه في كل ذبابة، وتحميل إبرة الشعيرات الدموية مع عقيمة 5٪ تلوين الطعام في برنامج تلفزيوني وطرد السائل على قطرة من الزيت المعدني على ميكرومتر المرحلة 0.01 ملليمتر.
الاستغناء عن 10 ميكرولتر من 1.6 ملليغرام لكل ملليلتر الجسيمات على مربع صغير من البارافيلم وسحب السائل في الإبرة. الجانب البطني لأعلى، مع توجيه الرؤوس نحو مقدمة الوسادة. ضع القنينات في المناطق المقابلة على مقاعد البدلاء وحقن الذباب في الزاوية العليا من البطن بخمس مضخات من السائل سعة 100 مللي ثانية لتسليم حوالي 10 نانولترات من إجمالي الجسيمات. نقل كل ذبابة إلى القارورة المناسبة أثناء حقنها، مع ملاحظة الوقت على القارورة.
بعد ذلك ، قم بتحميل إبرة جديدة بمحلول Trypan Blue بنسبة 0.4٪ وتعيين المحقن الهوائي إلى "مسور" للسماح بتدفق مستمر للهواء لدفع السائل من الإبرة. بعد 30 دقيقة من الحقنة الأولية، قم بحقن كل بطن ذبابة ب Trypan Blue حتى تمتلئ البطن وتنزع.
