Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Forbered koniske injektionsnåle ved at trække tyndvæggede glaskapillærer ved hjælp af en nåletrækker. Hold en nål under et mikroskop og bryde spidsen, og sørg for, at åbningen er lige stor nok til at gennembore den voksne flyve kutikula uden at såre det mere end nødvendigt. indstillingerne i overensstemmelse hermed.
Læg nålen med injektionsopløsningen og monter den på en injektionsdyse. Bedøve dine fluer med CO2 og arrangere dem på en CO2-fluepude, der holder dem bedøvet. Når fluerne er i den rigtige retning til dit eksperiment, fortsæt med injektionerne. I eksempelprotokollen injicerer vi voksne fluer med fluoresceinmærkede partikler til in vivo imaging.
- Efter at have trukket tyndvæggede glas kapillærer med en nål puller, Brug et mikrometer til at holde nålen under et mikroskop og bruge nummer fem fine-punkts rustfrit stål pincet til at bryde spidsen til en 100 mikrometer spids diameter. At måle mængden af væske, der vil blive injiceret i hver flue, indlæse en kapillær nål med sterile 5% mad farve i PBS og udvise væsken på en dråbe mineralsk olie på en 0,01 millimeter fase mikrometer.
Dispenser 10 mikroliter på 1,6 milligram pr. milliliter partikler på en lille firkant af parafilm og træk væsken ind i nålen. Monter nålen ind i injektordysen og line de bedøvede fluer langs deres udpegede område på fluepuden, ventral side op, med hovederne orienteret mod forsiden af puden. Placer hætteglassene i tilsvarende områder på bænken og injicere fluer i øverste hjørne af maven med fem 100 millisekunder pumper af væske til at levere omkring 10 nanoliters af partikler i alt. Overfør hver flyve ind i passende hætteglas, da det injiceres, bemærke tid på hætteglasset.
Derefter skal du indlæse en ny nål med 0,4% Trypan Blue-opløsning og indstille den pneumatiske injektor til 'gated' for at tillade en konstant luftstrøm for at skubbe væsken ud af nålen. 30 minutter efter den første injektion injiceres hver flyvende mave med Trypan Blue, indtil maven er fuld og udspilet. Monter fluerne på mikroskopdias med elektrisk tape ventral side ned, skub vingerne til siden af fluen for at fastgøre dem til båndet. Skub derefter forsigtigt hovedet ind i båndet for at sikre, at fluen ikke bevæger sig.
