Injectie van volwassen Drosophila-vliegen: een methode voor samengestelde of labelafgifte

- Bereid taps toelopende injectienaalden voor door dunwandige glazen haarvaten te trekken met behulp van een naaldtrekker. Houd een naald onder een microscoop en breek de punt, zorg ervoor dat de opening net groot genoeg is om de volwassen vlieg cuticula te doorboren zonder deze meer te verwonden dan nodig is. Meet het injectievolume door uw naald te laden met een steriele kleurstof- en zoutbufferoplossing en deze vervolgens uit te werpen op een druppel minerale olie op een stadiummicrometer. instellingen dienovereenkomstig.

Laad de naald met uw injectieoplossing en monteer deze op een injectiemondstuk. Verdoof uw vliegen met CO2 en schik ze op een CO2-vliegenkussen dat ze verdoofd houdt. Zodra de vliegen in de juiste oriëntatie zijn voor uw experiment, gaat u verder met de injecties. In het voorbeeldprotocol injecteren we volwassen vliegen met fluoresceïne-gelabelde deeltjes voor in vivo beeldvorming.

- Gebruik na het trekken van dunwandige glazen haarvaten met een naaldtrekker een micrometer om de naald onder een microscoop te houden en gebruik nummer vijf fijnpunts roestvrijstalen pincet om de punt te breken tot een tipdiameter van 100 micrometer. Om het volume vloeistof te meten dat in elke vlieg wordt geïnjecteerd, laadt u een capillaire naald met steriele 5% voedselkleurstof in PBS en verdrijft u de vloeistof op een druppel minerale olie op een micrometer van 0,01 millimeter.

Doseer 10 microliter van 1,6 milligram per milliliter deeltjes op een klein vierkantje parafilm en trek de vloeistof in de naald. Monteer de naald in het injectormondstuk en bekleed de verdoofde vliegen langs hun aangewezen gebied op het vliegenkussen, ventrale kant naar boven, met de hoofden gericht op de voorkant van de pad. Plaats de flacons in overeenkomstige gebieden op de bank en injecteer de vliegen in de bovenhoek van de buik met vijf pompen van 100 milliseconden vloeistof. de tijd op de flacon.

Laad vervolgens een nieuwe naald met 0,4% Trypan Blue-oplossing en zet de pneumatische injector op 'gated' om een constante luchtstroom mogelijk te maken om de vloeistof uit de naald te duwen. Injecteer 30 minuten na de eerste injectie elke vliegbuik met Trypan Blue totdat de buiken vol en opgezwollen zijn. Monteer de vliegen op microscoopglijbanen met elektrische tape ventrale kant naar beneden, duw de vleugels naar de zijkant van de vlieg om ze vast te zetten aan de tape.