Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- הכן מחטי הזרקה מחודדות על ידי משיכת נימי זכוכית דקים באמצעות מושך מחט. ודא כי הפתח הוא רק גדול מספיק כדי לנקב את קוטיקולה זבוב למבוגרים מבלי לפצוע אותו יותר מהנדרש. הגדרות בהתאם.
טען את המחט עם פתרון ההזרקה שלך והרכיב אותה על זרבובית הזרקה. הרדמה את הזבובים שלך עם CO2 ולסדר אותם על כרית זבוב CO2 שישמור אותם מורדמים. ברגע הזבובים נמצאים בכיוון הנכון לניסוי שלך, להמשיך עם הזריקות. בפרוטוקול לדוגמה, נזריק זבובים מבוגרים עם חלקיקים שכותרתו פלואורסצנטין להדמיה vivo.
- לאחר משיכת נימי זכוכית דקים עם מפולת מחט, השתמש במיקרומטר כדי להחזיק את המחט מתחת למיקרוסקופ ולהשתמש בפינצטה של נירוסטה מספר חמש כדי לשבור את הקצה לקוטר של 100 מיקרומטר.
לוותר על 10 מיקרוליטרים של 1.6 מיליגרם לכל חלקיקי מיליליטר על ריבוע קטן של parafilm ולמשוך את הנוזל לתוך המחט. צד הגחוני למעלה, עם הראשים מכוונים לכיוון החלק הקדמי של הכרית. הזמן על הבקבוקון.
לאחר מכן, לטעון מחט חדשה עם 0.4% Trypan פתרון כחול ולהגדיר את מזרק פנאומטי "מגודר" כדי לאפשר זרימה מתמדת של אוויר לדחוף את הנוזל מתוך המחט. 30 דקות לאחר ההזרקה הראשונית, להזריק כל בטן לעוף עם Trypan כחול עד הבטן מלאים נפוחים. הר זבובים על שקופיות מיקרוסקופ עם סרט חשמלי בצד הגחוני למטה, דוחף את הכנפיים לצד הזבוב כדי לאבטח אותם לקלטת.
