Inyección de moscas drosophila adultas: un método de entrega de compuestos o etiquetas

- Preparar agujas de inyección cónicas tirando de capilares de vidrio de paredes delgadas usando un extractor de agujas. Sostenga una aguja debajo de un microscopio y rompa la punta, Asegurarse de que la abertura es lo suficientemente grande como para perforar la cutícula de mosca adulta sin herirla más de lo necesario. Mida el volumen de inyección cargando la aguja con una solución estéril de tinte y tampón de sal y luego expulsándola sobre una gota de aceite mineral en un micrómetro del escenario. ajustes en consecuencia.

Cargue la aguja con su solución de inyección y colóquela en una boquilla de inyección. Anestesista sus moscas con CO2 y colóquelas en una almohadilla de mosca de CO2 que las mantendrá anestesiadas. Una vez que las moscas estén en la orientación correcta para su experimento, proceda con las inyecciones.

- Después de tirar de capilares de vidrio de paredes delgadas con un extractor de aguja, utilizar un micrómetro para sujetar la aguja bajo un microscopio y utilizar pinzas de acero inoxidable de punto fino número cinco para romper la punta a un diámetro de punta de 100 micrómetros. Para medir el volumen de líquido que se inyectará en cada mosca, cargue una aguja capilar con coloración estéril del 5% de los alimentos en PBS y expulse el líquido sobre una gota de aceite mineral en un micrómetro de etapa de 0,01 milímetros.

Dispense 10 microlitros de 1,6 miligramos por partículas de mililitro en un pequeño cuadrado de parafilm y tire del líquido hacia la aguja. Monte la aguja en la boquilla del inyector y forre las moscas anestesiadas a lo largo de su área designada en la almohadilla de vuelo, lado ventral hacia arriba, con las cabezas orientadas hacia la parte delantera de la almohadilla. Coloque los viales en las áreas correspondientes en el banco e inyecte las moscas en la esquina superior del abdomen con cinco bombas de 100 milisegundos de líquido para entregar alrededor de 10 nanolitros de partículas en total. la hora en el vial.

A continuación, cargue una aguja nueva con solución 0.4% Trypan Blue y ajuste el inyector neumático a 'cerrado' para permitir un flujo constante de aire para empujar el líquido fuera de la aguja. 30 minutos después de la inyección inicial, inyecte cada abdomen de mosca con Trypan Blue hasta que los abdomens estén llenos y distendidos. Monte las moscas en diapositivas del microscopio con cinta eléctrica hacia abajo, empujando las alas hacia el lado de la mosca para asegurarlas a la cinta.