CApillary FEeder (CAFE) Анализ: Метод отслеживания потребления продуктов питания и предпочтений в Дрозофиле

- Для подготовки к Капиллярной подачи, или CAFE анализ, вставьте градуированные или отмеченные стеклянные капилляры, наполненные цветной, жидкой пищей, нижний конец во-первых, через пипетку советы поверх заранее собранного экспериментального флакона. Убедитесь, что капилляры надежно размещены на той же высоте и не находятся в контакте с аппаратом.

Отметьте стартовый уровень мениска в каждом капилляре. Затем дом флаконы в температуре, влажности и свет-контролируемой среде в течение всего эксперимента при замене капилляров по мере необходимости. Во время анализа CAFE, мобильные мухи являются безудержными и имеют свободный доступ к нижней открытой части micropipette. Мухи кормить добровольно, как они расширяют свои хоботок и потребление жидкости.

Чтобы отслеживать потребление пищи и предпочтение в течение определенного периода времени, записывают спуск мениска от стартовой отметки до уровня в конце этого периода от квалификационных капилляров. В примере протокола мы увидим анализ CAFE с помощью сборки, измененной для достижения уменьшенного испарения из заполненных жидкостью капилляров.

- Тщательно удалите наконечник пипетки, который закрывает один из внешних отверстий, и вставьте заполненные стеклянные капилляры, нижний конец во-первых. Безопасный капилляр, поместив наконечник пипетки обратно рядом с капилляром. Повторите этот шаг для всех пищевых решений испытания.

Далее поместите капиллярные концы внутри всех флаконов на том же уровне, от 3 до 4 сантиметров от крышки. Оставьте некоторое расстояние между фильтровальной бумагой, чтобы предотвратить утечку капилляров. Используйте маркерную ручку, чтобы обозначить верхний конец цветной жидкости.

Место подготовлено CAFE анализы в пластиковую коробку с сеткой вставки. Используйте губку bung применять 100 микролитров пресной воды каждые 24 часа, чтобы сохранить влажность постоянной внутри анализа. Используйте четыре отдельных флаконов заполнены 30 миллилитров двойной дистиллированной H2O в качестве влажности устройств, и поместите их рядом с CAFE анализы в пластиковой коробке.

Обложка пластиковой коробке для создания влажности контролируемой окружающей среды во время эксперимента. Передача окна в безопасное положение в температуре, свет, и влажность контролируемой климатической камеры для экспериментального периода. Перед каждым 24-часовой интервал, обратите внимание на мертвых мух, и использовать количество живых мух для расчета потребления на лету в течение следующего периода.

В конце анализа и перед заменой капилляра держите анализ CAFE в вертикальном положении. Не снимите крышку и отметьте нижний мениска капилляра. Отбросьте данные, если конец знака не ниже первоначальной отметки. Заменить использованные капилляры свежезаполшенными капиллярами для длительных экспериментов каждые 24 часа.

Измерьте снижение мениска. Затем отбросьте старые капилляры. Затем осторожно удалите капилляры из анализа и храните их для сбора данных. Проверьте, достигла ли жидкость внутри капилляра нижнего конца. Если жидкость внутри капилляра не достигла нижнего конца, отбросьте данные.

После эксперимента демонтируйте установку, и мыть флаконы, крышки и губки койки в мыльной ванне. Затем высушите их на ночь при комнатной температуре для дальнейшего использования. Повторите эксперименты с теми же генотипами по крайней мере три различных дня.