Préparation des filets larvaires : une méthode pour visualiser les neurones sensoriels intacts et les cellules épidermiques associées

- Pour orienter une larve pour la dissection de filet, placez-la dans un plat recouvert de silicone contenant de la solution saline froide et identifiez ses côtés dorsal et ventral. Les tubes trachéaux qui courent le long de sa longueur marquent le côté dorsal, tandis que les ceintures abdominales denticle identifient le côté ventral.

Ensuite, avec le côté ventral vers le haut, étirez doucement la larve et épinglez chaque extrémité au fond du plat. Cette position gardera les amas dorsal des neurones sensoriels multi-dendritiques et les cellules épidermiques associées intactes pendant que la dissection procède.

Utilisez des ciseaux dissectants pour couper le long de la ligne médiane ventrale de la larve. Épinglez la cuticule à la plaque pour aplatir la préparation et enlever les structures internes pour révéler le tissu musculaire sous-jacent. Puis, retirez soigneusement le muscle approprié pour exposer l’épiderme et accéder aux neurones précédemment obscurcis tout en préservant leur morphologie dendritique.

Dans le protocole d’exemple, nous verrons une démonstration détaillée de la préparation larvaire de filet et de l’enlèvement de muscle pour voir les neurones sensoriels de da et les cellules épidermiques.

- Pour commencer, ajouter suffisamment de solution saline froide à un plat élastomer en silicone pour couvrir la surface inférieure. Ajouter la larve du sujet au plat et la placer sous le microscope stéréo, assurant un bon placement de la lumière. Placez la larve avec le côté ventral vers le haut, qui peut être identifié par les ceintures abdominales denticles.

Étirer la larve dans la direction antérieure-postérieure, et à l’aide d’épingles à insectes, épingler la tête et la queue au fond du plat. Avec une paire de ciseaux disséquants fins, couper le long de la ligne médiane ventrale de la larve d’un bout à l’autre. Étendre la larve ouverte et épingler le tissu cuticule aux quatre coins de sorte qu’il se trouve à plat.

À l’aide de forceps, retirer les organes internes, y compris le SNC, l’intestin et la trachée. Ajustez les broches des insectes de façon à ce que le filet soit tendu, mais pas étiré au maximum.

Localiser la ligne médiane dorsale de la larve, où le tissu musculaire est absent, puis placer une pince de forceps à l’intérieur de cette limite. Faites glisser la prong entre le muscle et l’épiderme, en prenant soin de minimiser le contact avec l’épiderme.

- Pour minimiser les dommages à l’épiderme, disséquez avec les dents les plus plates possibles. Et essayez de disséquer dans la solution saline contenant du calcium. Cela pourrait aider à créer de l’espace entre le muscle et l’épiderme.

- Ensuite, tirez les forceps vers le haut pour briser l’attachement du muscle à la paroi du corps à un point d’ancrage. Répétez ce processus pour les segments musculaires restants d’intérêt.

Réajuster les enclos à insectes pour étirer au maximum le filet larvaire dans toutes les directions.