幼虫フィレの調製:無傷の感覚ニューロンおよび関連する表皮細胞を可視化する方法

- 切り身解剖のために幼虫の向きを与えるために、冷たい生理食音を含むシリコーンコーティングされた皿に入れて、その側の側と腹側を識別します。

その後、腹側を上にして、幼虫をそっと伸ばし、各端を皿の底までピン留めします。この位置は、解剖が進むにつれて、感覚多樹状ニューロンの後側クラスターと関連する表皮細胞をそのまま維持します。

解剖ハサミを使って幼虫の腹側正中線に沿って切断し、キューティクルをプレートにピンで留め、準備を平らにし、内部構造を取り除いて根底にある筋肉組織を明らかにする。その後、適切な筋肉を慎重に取り除いて表皮を露出させ、樹状形態を維持しながら以前に隠されていたニューロンにアクセスする。

プロトコルの例では、幼虫フィレット調製と筋肉除去の詳細なデモンストレーションを見て、感覚的なダニューロンおよび表皮細胞を見る。

- まず、底面を覆うのに十分な冷たい生理食音をシリコーンエラストマー皿に加え、被験者の幼虫を皿に加えて、それをステレオ顕微鏡の下に置き、光の適切な配置を確保します。

幼虫を前部後方向に伸ばし、昆虫ピンを使って頭と尾を皿の底に固定します。

鉗子を使って、CNS、腸、気管などの内臓を取り除く。

筋肉組織が存在しない幼虫の後頭中線を見つけ、この境界の内部に鉗子を配置します。

- 表皮の損傷を最小限に抑えるために、最も平坦な可能性のあるプロングで解剖し、カルシウム含有生理生理の解剖を試みる。それは筋肉と表皮の間にスペースを作るのに役立つ可能性がある。

- 次に鉗子を上方に引っ張って、1つのアンカーポイントで体壁への筋肉の付着を断ち切ります。

昆虫のペンを取り付けなおして、幼虫のフィレットを最大限に伸ばします。