Ларвал Филе Подготовка: Метод визуализации Intact сенсорных нейронов и связанных эпидермальных клеток

- Чтобы сориентировать личинку для вскрытия филе, поместите ее в силиконовую тарелку, содержащую холодный солевой раствор, и определите ее спинную и вентальную стороны. Трахеальные трубки, испехащие по ее длине, отмечают спинную сторону, в то время как брюшные пояса вмятины определяют вентраловую сторону.

Затем, с брюшной стороны вверх, осторожно растянуть личинки и контактный каждый конец в нижней части блюда. Это положение будет держать спинные кластеры сенсорных мульти-дендритических нейронов и связанных с ними эпидермальных клеток нетронутыми, как вскрытие продолжается.

Используйте рассечение ножницами, чтобы сократить вдоль брюшной средней линии личинки. Pin кутикулы к пластине, чтобы сгладить подготовку и удалить внутренние структуры, чтобы выявить основные мышечной ткани. Затем, тщательно удалить соответствующие мышцы подвергать эпидермиса и получить доступ к ранее скрытых нейронов при сохранении их дендритической морфологии.

В примере протокола, мы увидим подробную демонстрацию личинок филе подготовки и удаления мышц для просмотра сенсорных да нейронов и эпидермальных клеток.

- Для начала добавьте достаточно холодного солевого раствора в силиконовое блюдо ерастомера, чтобы покрыть нижнюю поверхность. Добавьте личинку предмета к блюду и поместите ее под стерео микроскоп, обеспечивая правильное размещение света. Положение личинки с вентраальной стороной вверх, которые могут быть определены брюшными поясами.

Растянуть личинку в передней-задней направлении, и с помощью насекомых булавки, контактный голову и хвост в нижней части блюда. С парой мелких рассечения ножниц, вырезать вдоль брюшной средней линии личинки с одного конца на другой. Распространение личинки открытым и контактный кутикулы ткани на четырех углах, так что он лежит плоским.

Используя типсы, удалите внутренние органы, включая ЦНС, кишечник и трахею. Отрегулируйте булавки насекомых так, чтобы филе было натянутым, но не максимально растянутым.

Найдите спинную середину личинки, где отсутствует мышечная ткань, а затем распоистите щипцы зубца в интерьере этой границы. Сдвиньте зубец между мышцей и эпидермисом, заботясь о минимизации контакта с эпидермисом.

- Чтобы свести к минимуму повреждение эпидермиса, вскрыть с плоскими возможными зубцами. И попробуйте вскрытия в кальцийсодержащих солевой раствор. Это может помочь создать пространство между мышцей и эпидермисом.

- Далее, потяните типсы вверх, чтобы сломать прикрепление мышцы к стене тела в одной точке якоря. Повторите этот процесс для остальных сегментов мышц, представляющих интерес.

Отрегулируйте ручки насекомых, чтобы максимально растянуть филе личинки во всех направлениях.