Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Ларвал Филе Подготовка

 
Click here for the English version

Ларвал Филе Подготовка: Метод визуализации Intact сенсорных нейронов и связанных эпидермальных клеток

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Чтобы сориентировать личинку для вскрытия филе, поместите ее в силиконовую тарелку, содержащую холодный солевой раствор, и определите ее спинную и вентальную стороны. Трахеальные трубки, испехащие по ее длине, отмечают спинную сторону, в то время как брюшные пояса вмятины определяют вентраловую сторону.

Затем, с брюшной стороны вверх, осторожно растянуть личинки и контактный каждый конец в нижней части блюда. Это положение будет держать спинные кластеры сенсорных мульти-дендритических нейронов и связанных с ними эпидермальных клеток нетронутыми, как вскрытие продолжается.

Используйте рассечение ножницами, чтобы сократить вдоль брюшной средней линии личинки. Pin кутикулы к пластине, чтобы сгладить подготовку и удалить внутренние структуры, чтобы выявить основные мышечной ткани. Затем, тщательно удалить соответствующие мышцы подвергать эпидермиса и получить доступ к ранее скрытых нейронов при сохранении их дендритической морфологии.

В примере протокола, мы увидим подробную демонстрацию личинок филе подготовки и удаления мышц для просмотра сенсорных да нейронов и эпидермальных клеток.

- Для начала добавьте достаточно холодного солевого раствора в силиконовое блюдо ерастомера, чтобы покрыть нижнюю поверхность. Добавьте личинку предмета к блюду и поместите ее под стерео микроскоп, обеспечивая правильное размещение света. Положение личинки с вентраальной стороной вверх, которые могут быть определены брюшными поясами.

Растянуть личинку в передней-задней направлении, и с помощью насекомых булавки, контактный голову и хвост в нижней части блюда. С парой мелких рассечения ножниц, вырезать вдоль брюшной средней линии личинки с одного конца на другой. Распространение личинки открытым и контактный кутикулы ткани на четырех углах, так что он лежит плоским.

Используя типсы, удалите внутренние органы, включая ЦНС, кишечник и трахею. Отрегулируйте булавки насекомых так, чтобы филе было натянутым, но не максимально растянутым.

Найдите спинную середину личинки, где отсутствует мышечная ткань, а затем распоистите щипцы зубца в интерьере этой границы. Сдвиньте зубец между мышцей и эпидермисом, заботясь о минимизации контакта с эпидермисом.

- Чтобы свести к минимуму повреждение эпидермиса, вскрыть с плоскими возможными зубцами. И попробуйте вскрытия в кальцийсодержащих солевой раствор. Это может помочь создать пространство между мышцей и эпидермисом.

- Далее, потяните типсы вверх, чтобы сломать прикрепление мышцы к стене тела в одной точке якоря. Повторите этот процесс для остальных сегментов мышц, представляющих интерес.

Отрегулируйте ручки насекомых, чтобы максимально растянуть филе личинки во всех направлениях.

Tags

Пустое значение выпуск
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter