लार्वा लिम्फ ग्रंथि विच्छेदन: ड्रोसोफिला हीमोसाइट-उत्पादक अंग को अलग करना

- ड्रोसोफिला मेलानोगेस्टर लार्वा लिम्फ ग्रंथि हीमोसाइट्स के उत्पादन के लिए जिम्मेदार है, या रक्त कोशिकाएं, जो लार्वा हीमोलिम्फ में प्रसारित होती हैं। लिम्फ ग्रंथि की पहचान करने के लिए, सबसे पहले पृष्ठीय पोत या हृदय को ढूंढें, जो पूरे शरीर में हीमोलिम्फ पंप करते हैं। जब तक आपको मस्तिष्क नहीं मिल जाता तब तक सिर की ओर पृष्ठीय पोत का पालन करें । लिम्फ ग्रंथि मस्तिष्क के बगल में एक छोटी, बहु-lobed संरचना है, पृष्ठीय पोत flanking ।

प्राथमिक पालि खोजने के लिए, ग्रंथि के सबसे बड़े पालि की पहचान करें। इस पालि में तीन क्षेत्र होते हैं, हीमोसाइट विकास के विभिन्न चरणों द्वारा परिभाषित किया गया है। पृष्ठीय पोत के निकटतम मेडुलरी क्षेत्र में अपरिपक्व हेमोसिट होते हैं, जबकि कॉर्टिकल क्षेत्र में परिपक्व हेमोसाइट्स होते हैं। प्राथमिक लोब के पीछे के छोर पर, आप पीछे के संकेत केंद्र पा सकते हैं, जो विशेष हेमोसाइट्स से बना है। माध्यमिक और तृतीयक लोब छोटे होते हैं और परिभाषित क्षेत्र नहीं होते हैं।

लिम्फ ग्रंथि को विच्छेदन करने के लिए, आपको लार्वा में हेरफेर करने के लिए एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप, दो संदंश और एक बफर नमकीन समाधान की आवश्यकता होगी।

इस उदाहरण में, हम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री में उपयोग के लिए लिम्फ ग्रंथियों को विच्छेदन करेंगे।

- लिम्फ ग्रंथि विच्छेदन शुरू करने के लिए, प्रत्येक प्रयोगात्मक सेटिंग को विच्छेदित करने के लिए 24-अच्छी तरह से प्लेट के 1x पीबीएस के 1 मिलीलीटर को अच्छी तरह से जोड़ें। इसके बाद डिस्पोजेबल ट्रांसफर पिपेट का इस्तेमाल करते हुए हर कुएं में 0.1% पीबीसेंट की 1 बूंद डालें। प्लेट को बर्फ पर सपाट रखें। एक प्रबुद्ध स्टीरियोमाइक्रोस्कोप बेस पर एक साफ विच्छेदन पैड रखें। 0.01% पीबीसेंट की एक बूंद पैड पर रखने के लिए डिस्पोजेबल ट्रांसफर पिपेट का उपयोग करें।

विच्छेदन के लिए पीबीएसटी ड्रॉप में लार्वा स्थानांतरित करें। लावा को एक जोड़ी संदंश के साथ पकड़ें, पृष्ठीय पक्ष ऊपर, पीछे के अंत से लगभग 1/4 लंबाई। दूसरी जोड़ी संदंश के साथ, क्यूटिकल को तुरंत पूर्वकाल को पहली जोड़ी में ले जाएं और धीरे-धीरे लार्वा क्यूटिकल को पूर्वकाल की ओर खींचें, जब तक कि मुंह के हुक सामने न आ जाएं।

क्यूटिकल को रिलीज करें और लार्वा को विभाजित करने के लिए दोनों संदंश का उपयोग करें। PBST ड्रॉप से पीछे के छोर को हटा दें और त्यागें। स्थिरता के लिए क्यूटिकल को पिन करें और फिर उजागर मुंह के हुक को हड़पने के लिए दूसरी जोड़ी संदंश का उपयोग करें और धीरे-धीरे उन्हें बाहर निकालें। यह क्यूटिकल को आंतरिक संरचनाओं से अलग करेगा।

मुंह के हुक को पकड़ते हुए, लार ग्रंथियों, वसा शरीर और आंत जैसी अवांछित संरचनाओं को सावधानीपूर्वक हटा दें। धीरे-धीरे विच्छेदित ऊतक परिसर को मुंह के हुक से उठाएं और इसे बर्फ पर प्लेट के एक कुएं में स्थानांतरित करें। विच्छेदन को वांछित के रूप में कई लार्वा के साथ दोहराएं, लेकिन निर्धारण चरण में आगे बढ़ने से पहले 30 मिनट के विच्छेदन समय से अधिक न करें।

बढ़ते टिश्यू को शुरू करने के लिए, एक ग्लास स्लाइड पर बढ़ते बफर की एक बूंद रखें। मुंह के हुक को हैंडल के रूप में उपयोग करके, लिम्फ ग्रंथि को बफर ड्रॉपलेट में स्थानांतरित करें। ऊतकों को समान रूप से अंतरिक्ष में रखें, इस प्रक्रिया में बढ़ते बफर को फैलाएं।

पृष्ठीय पोत के नीचे संदंश के एक टोंड को सावधानीपूर्वक स्लाइड करें, बढ़ते बफर की परिधि की ओर धीरे-धीरे खींचकर लिम्फ ग्रंथि को समतल करें। एक चीर गति के साथ, लिम्फ ग्रंथि और मस्तिष्क के बीच पृष्ठीय पोत को काटें। शेष ऊतकों को लिम्फ ग्रंथि से दूर बफर के सबसे बाहरी किनारे पर ले जाएं।

एक साफ कवर स्लिप लें और इसे बढ़ते बफर पर सावधानी से कम करें। स्लाइड्स अब इमेजिंग के लिए तैयार हैं या जरूरत पड़ने पर 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर किया जा सकता है।