Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
-בלוטת הזחל של דרוזופילה מלנוגאסטר אחראית לייצור המוציטים, או תאי דם, כי במחזור hemolymph הזחל. כדי לזהות את בלוטת הלימפה, הראשון למצוא את כלי הגב, או הלב, אשר משאבות hemolymph בכל הגוף. בצע את כלי הגב לכיוון הראש עד שתמצא את המוח. בלוטת הלימפה היא מבנה קטן, רב lobed ליד המוח, אגף כלי הגב.
כדי למצוא את האונה העיקרית, לזהות את האונה הגדולה ביותר של הבלוטה. האונה הזו מכילה שלושה אזורים, המוגדרים על ידי שלבים שונים של התפתחות המוציטים.
כדי לנתח את בלוטת הלימפה, תצטרך מיקרוסקופ לנתח, שני מלקחיים כדי לתפעל את הזחלים, ופתרון מלוחים אגץ.
בדוגמה זו, אנו לנתח בלוטות הלימפה לשימוש אימונוהיסטוכימיה.
- כדי להתחיל ניתוח בלוטת הלימפה, להוסיף 1 מיליליטר של 1x PBS ל 1 גם של צלחת 24-well עבור כל הגדרה ניסיונית להיות מנותח. לאחר מכן, באמצעות פיפטה העברה חד פעמית, להוסיף 1 טיפה של 0.1% PBST לכל באר.
העבר זחל לטיפת PBST לניתוח. החזק את הלבה עם זוג מלקחיים אחד, צד הגב למעלה, כ 1/4 אורך מהקצה האחורי.
שחרר את הקוטיקולה והשתמש בשני המלקחיים כדי לחתוך את הזחל. הסר את הקצה האחורי מהטיפה PBST והשליך.
שמירה על ווים בפה, להסיר בזהירות מבנים לא רצויים, כגון בלוטות הרוק, גוף השומן, המעי.
כדי להתחיל הרכבה רקמה, למקם טיפה של חיץ הרכבה על שקופית זכוכית. באמצעות ווים בפה כמו ידית, להעביר את בלוטת הלימפה לטיפת החיץ.
בזהירות להחליק טונג אחד של המלקחיים מתחת לכלי הגב, בעדינות מושך לכיוון הפריפריה של חיץ הרכבה לצייר ולשטח את בלוטת הלימפה. עם תנועת ניסור, לחתוך את כלי הגב בין בלוטת הלימפה למוח.
קח תלוש כיסוי נקי והורד אותו בזהירות על מאגר ההרכבה. השקופיות מוכנות כעת להדמיה או שניתן לאחסן ב- 4 מעלות צלזיוס עד לצורך.