Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Drosophila melanogaster larv lymfkörteln ansvarar för produktionen av hemocyter, eller blodkroppar, som cirkulerar i larv hemolymfen. För att identifiera lymfkörteln, hitta först dorsalkärlet eller hjärtat, som pumpar hemolymf i hela kroppen.
Om du vill hitta den primära loben identifiera körtelns största lob. Denna lob innehåller tre zoner, definierade av olika stadier av hemocytutveckling.
För att dissekera lymfkörteln behöver du ett dissekerande mikroskop, två tång för att manipulera larverna och en buffrad saltlösning.
I det här exemplet kommer vi att dissekera lymfkörtlar för användning i immunohistokemi.
- För att påbörja dissekering av lymfkörteln, tillsätt 1 milliliter 1x PBS till 1 brunn på en 24-brunnsplatta för varje experimentell inställning som ska dissekeras. Lägg sedan till 1 droppe 0,1% PBST till varje brunn med hjälp av en engångsöverföringspipett.
Överför en larva till PBST-droppen för dissekering. Håll lavan med ett par tångar, dorsala sida upp, ungefär 1/4 längd från den bakre änden.
Släpp nagelbandet och använd båda tångarna för att dela larven. Ta bort den bakre änden från PBST-droppen och kassera.
Håll i munkrokarna, ta försiktigt bort oönskade strukturer, som salivkörtlarna, fettkroppen och tarmarna.
För att påbörja vävnadsmontering, placera en droppe monteringsbuffert på en glasrutschbana. Använd munkrokarna som handtag, överför lymfkörteln till buffertdropparet.
Skjut försiktigt en tång av tången under dorsalkärlet och dra försiktigt mot monteringsbuffertens periferi för att dra ut och platta till lymfkörteln.
Ta en ren täcksänka och sänk försiktigt ner den på monteringsbufferten. Bilderna är nu klara för avbildning eller kan förvaras i 4 grader Celsius tills det behövs.
