Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.

Drosophila Volwassen hersendissectie

 
Click here for the English version

Drosophila Volwassen hersendissectie: een methode in vliegneurobiologie

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Voer de dissectie uit in een schaal met een bufferoplossing en onder uniforme verlichting. Breng een vlieg, ventrale kant naar boven, in de schaal en houd het preparaat ondergedompeld tijdens de procedure. Terwijl u de basis van de proboscis vasthoudt, trekt u de vliegkop voorzichtig weg van het lichaam om de twee te scheiden. De hersenen bevinden zich aan de achterkant, of caudale kant, van het hoofd van de vlieg. Houd daarom delen van de cuticula aan de voorkant of rostrale delen van de cuticula vast tijdens de dissectie.

Om de hersenen te isoleren, houdt u de mediale rand van het ene oog vast en grijpt en trekt u de proboscis in de tegenovergestelde richting om een opening in de hoofdcapsule te creëren. Terwijl u de nagelriem bij dat oog houdt, grijpt u de mediale rand van de cuticula van het andere oog en trekt u de hoofdcapsule langzaam recht uit elkaar om de hersenen te onthullen. Indien nodig, doorgaan met het verwijderen van de resterende cuticula, bijgevoegde luchtzakken of luchtpijp. gebruikt om de paddestoellichamen te bestuderen.

- Om in te stellen voor de dissectie, plaats de verdoofde vliegen van belang op een koud metalen pad of in een Petrischaal zittend op ijs. Als alternatief, gebruik een vliegenkussen dat kooldioxide uitstoot. Plaats vervolgens een kleine hoeveelheid PTN in het midden van de dissectieschaal om een bubbel van PTN te creëren. Vul vervolgens onder een stereomicroscoop het gezichtsveld met de PTN-bel onder uniforme verlichting. Manipuleer nu vliegen zodat ze buik omhoog zijn en breng er een over. een tweede tang, pak de proboscis en trek het hoofd van het lichaam.

- Occassioneel wordt de proboscis verwijderd, maar het hoofd blijft aan het lichaam gehecht. Als dit gebeurt, pak dan de mediale rand van één netvlies en oefen laterale kracht uit om het hoofd te verwijderen.

- Gooi de buik en thorax weg. Het is van cruciaal belang om het hoofd in de PTN te houden tijdens deze stap. Verbindingen van de centrale hersenen met VNC kunnen duidelijk niet worden geanalyseerd met behulp van deze methode. Pak vervolgens de mediale rand van het linker netvlies aan de rand van het centrale gat in de nagelriem vast en trek de tang langzaam direct uit elkaar om scheuren van de optische kwab te voorkomen, de ondoorzichtige structuur bedekt met witte, stringy luchtpijp.

- Om te voorkomen dat de hersenen scheuren, is het van cruciaal belang om de mediale rand van elk oog vast te pakken en heel langzaam de tang uit elkaar te trekken. Te snel bewegen kan leiden tot veranderde hersenmorfologie of schade aan hersenweefsel.

- Zoals hier getoond, pak de cuticula met elk paar tangen en trek ze heel langzaam in tegengestelde richting. Als het correct wordt gedaan, moet de nagelriem zich scheiden van het hersenweefsel, waardoor de hersenen intact blijven. Zeer scherpe tangen zijn nodig voor deze stap. Verwijder vervolgens voorzichtig de omringende nagelriem stuk voor stuk. Terwijl u koppig bevestigde nagelriem verwijdert, kan het helpen om de hersenen vast te zetten door de resterende VNC vast te pakken om te voorkomen dat de hersenen worden verbrijzeld.

Tags

Lege waarde probleem
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter