Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Utfør disseksjonen i en tallerken med bufferløsning og under jevn belysning. Overfør en flue, ventral side opp, inn i parabolen og hold preparatet nedsenket gjennom hele prosedyren. Mens du holder basen av proboscis, trekk forsiktig fluehodet bort fra kroppen for å skille de to. Hjernen ligger på baksiden, eller kaudal side, av flyets hode. Derfor hold fast på forsiden, eller rostral, deler av neglebåndet under disseksjonen for å unngå å skade orgelet.
For å isolere hjernen, hold medialkanten av ett øye og grip og trekk proboscis i motsatt retning for å skape en åpning inn i hodekapselen. Mens du holder kutiklet på det øyet, ta tak i medialkanten av kutiklet fra det andre øyet og trekk sakte hodekapselen rett fra hverandre for å avsløre hjernen. Om nødvendig, fortsett å fjerne gjenværende kutikalle, vedlagte luftsekker eller luftrør. Preparater av høy kvalitet vil bevare strukturer som optiske lober, sentral hjerne og SOG. I eksempelprotokollen vil vi se en detaljert demonstrasjon av en Drosophila voksen hjerne disseksjon brukes til å studere sopp kroppene.
- For å sette opp disseksjonen, plasser de bedøvede fluene av interesse på en kald metallpute eller i en Petri-tallerken som sitter på isen. Alternativt kan du bruke en flypute som avgir karbondioksid. Deretter legger du en liten mengde PTN i midten av disseksjonsfatet for å lage en boble av PTN. Deretter, under et stereomikroskop, fyll synsfeltet med PTN-boblen under jevn belysning. Nå manipulerer du fluer slik at de er mage opp, og overfører en av magen til PTN. Senk dyret helt i PTN og utfør hele disseksjonen nedsenket i PTN. et annet par tang, ta tak i proboscis og trekk hodet av kroppen.
- Occassionally, proboscis vil bli fjernet, men hodet forblir festet til kroppen. Hvis dette skjer, ta tak i medialkanten av en netthinne og bruk lateral kraft for å fjerne hodet.
- Kast magen og thoraxen. Det er viktig å holde hodet i PTN i dette trinnet. Forbindelser fra den sentrale hjernen til VNC kan tydeligvis ikke analyseres ved hjelp av denne metoden. Deretter griper du medialkanten av venstre netthinne på kanten av det sentrale hullet i kutiklet, og trekker sakte tangene direkte fra hverandre for å forhindre tåre av den optiske loben, som er den ugjennomsiktige strukturen dekket av hvit, streng luftrør.
- For å forhindre at hjernen rives, er det kritisk viktig å gripe medialkanten av hvert øye og sakte trekke tangen fra hverandre.
- Som vist her, ta tak i kutiklet med hvert par tang og trekk dem veldig sakte i motsatte retninger. Hvis det gjøres riktig, skal kutiklet skille seg fra hjernevevet, la hjernen være intakt. Svært skarpe tang er nødvendig for dette trinnet. Deretter fjerner du forsiktig det omkringliggende kutiklet stykke for stykke. Mens du fjerner fast festet kutiklet, kan det bidra til å sikre hjernen ved å gripe den gjenværende VNC for å unngå å knuse hjernen. Til slutt, bruk en P200 pipette for å overføre de dissekerte hjernene til en brønn av en plate fylt med PTN for fiksering og immunstaining.
