Drosophila Dissecção cerebral adulta: um método em neurobiologia de moscas

- Realizar a dissecção em um prato com uma solução tampão e sob iluminação uniforme. Transfira uma mosca, lateral ventral para cima, para o prato e mantenha a preparação submersa durante todo o procedimento. Enquanto segura a base do proboscis, puxe suavemente a cabeça de mosca para longe do corpo para separar os dois. O cérebro está localizado na parte de trás, ou lado caudal, da cabeça da mosca.

Para isolar o cérebro, segure a borda medial de um olho e agarre e puxe os proboscis na direção oposta para criar uma abertura na cápsula da cabeça. Ao segurar a cutícula naquele olho, segure a borda medial da cutícula do outro olho e puxe lentamente a cápsula da cabeça para fora para revelar o cérebro. Se necessário, continue a limpar cutícula residual, sacos de ar ligados ou traqueia. Preparações de alta qualidade preservarão estruturas como os lobos ópticos, cérebro central e SOG. No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração detalhada de uma dissecção cerebral adulta Drosophila. usado para estudar os corpos de cogumelos.

- Para a instalação para a dissecção, coloque as moscas anestesiadas de interesse em uma almofada de metal frio ou em uma placa de Petri sentada no gelo. use uma almofada voadora que emite dióxido de carbono. Em seguida, coloque uma pequena quantidade de PTN no centro da placa de dissecção para criar uma bolha de PTN. Em seguida, sob um estereótipo, preencha o campo de visão com a bolha PTN sob iluminação uniforme. Agora, manipule moscas para que elas sejam barriga para cima, e transfira uma pelo abdômen para o PTN. Submergir completamente o animal no PTN e realizar toda a dissecção submersa em PTN. um segundo par de fórceps, agarrar o proboscis e puxar a cabeça do corpo.

- Occassionalmente, o proboscis será removido, mas a cabeça permanecerá presa ao corpo. Se isso ocorrer, pegue a borda medial de uma retina e aplique força lateral para remover a cabeça.

- Descarte o abdômen e o tórax. É fundamental manter a cabeça no PTN durante esta etapa. As conexões do cérebro central com o VNC claramente não podem ser analisadas usando este método. Em seguida, segure a borda medial da retina esquerda na borda do orifício central na cutícula, e lentamente puxe os fórceps diretamente separados um do outro para evitar o rasgo do lobo óptico, que é a estrutura opaca coberta por traqueia branca e stringy. À medida que a retina se dissociar, haverá uma ligeira diminuição da tensão.

- Para evitar que o cérebro se destrua, é extremamente importante compreender a borda medial de cada olho e muito lentamente puxar os fórceps.

- Como mostrado aqui, segure a cutícula com cada par de fórceps e muito lentamente puxe-as em direções opostas. a cutícula circundante deve se separar do tecido cerebral, deixando o cérebro intacto. Fórceps muito afiados são necessários para esta etapa. Em seguida, remova cuidadosamente a cutícula circundante pedaço por pedaço. Ao remover a cutícula teimosamente ligada, ela pode ajudar a proteger o cérebro, agarrando o VNC restante para evitar esmagar o cérebro.