Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Lad Drosophila lægge æg natten over på en skål, der indeholder agar suppleret med druesaft for at visualisere æg og belagt med gær for at tilskynde fluer til at parre sig og lægge æg. For at fjerne æggene tilsættes destilleret vand til skålen og tørres forsigtigt overfladen med en pensel. Hæld derefter blandingen gennem et nylonnet placeret i en plastbøsning for at samle æggene.
Æggene sidder nu fast på siden af bøsningen. Vask dem tre gange med vand for at fjerne blegemidlet. Endelig skal du bruge en pensel til at overføre æggene fra bøsningen til hætteglas for at fortsætte udviklingen eller til øjeblikkelig brug i et eksperiment. I eksempelprotokollen vil vi indsamle og dechorionate Drosophila æg under sterile forhold for at opdrætte fluer med defineret mikrobiota.
- Placer nylon mesh i en plastik bøsning for at forberede sigten til ægopsamling. Hvis de samme fluer vil blive brugt næste dag, skal du straks overføre dem til et nyt bur, der indeholder friskgært druesaft agarplader. Druesaftpladen i det foregående bur indeholder frugtflueæg. Fjern døde fluer med en ren pensel, og vær forsigtig med ikke at bryde agaren op. Skyl agarpladen med destilleret vand og børst forsigtigt æggene fra agarens overflade og hæld derefter gyllen over masken for at samle æggene.
Steriliser biosikkerhedsskabet med 70% ethanol, tænd derefter UV-lyset. Spray alle ikke-biologiske forsyninger med 70% ethanol og læg dem straks i biosikkerhedsskabet, og steriliser dem derefter med UV-lys.
- Det er afgørende at sikre, at der praktiseres god aseptisk teknik, når der arbejdes inden for eller ved tilsætning eller fjernelse af nye materialer til biosikkerhedsskabet.
- Overfør bøsningen med æggene til en 120-milliliter prøvekop og hæld langsomt 90 milliliter 0,6% natriumhypochloritopløsning, eller 7% blegemiddel, i bøsningen, lige under kanten.
I slutningen af den anden blegemiddelbehandling skal æggene begynde at klæbe til siderne af bøsningen. Kassér blegemidlet og skyl bøsningen helt med sterilt vand. Igen skal du bruge pincet til at genbruge ægget flere gange under hver vask. Ved afslutningen af den tredje vask skal de fleste æg fastgøres til siden af bøsningen.
Ved hjælp af en steril pensel overføres æggene fra siden af bøsningen til den sterile kost. Lad hætterne løsne for at tillade ilt at komme ind i røret. De overførte æg vil være synlige på overfladen af kosten.
