Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Laat Drosophila 's nachts eieren leggen op een schaal met agar aangevuld met druivensap om eieren te visualiseren en bedekt met gist om vliegen aan te moedigen om te paren en eieren te leggen. Om de eieren te verwijderen, voegt u gedestilleerd water toe aan de schaal en veegt u het oppervlak voorzichtig af met een penseel. Giet het mengsel vervolgens door een nylon gaas dat in een plastic bus is geplaatst om de eieren te verzamelen. Week de eieren in twee rondes van 7% bleekmiddel om het koraal, of beschermende buitenste laag, uit het embryo te verwijderen.
De eieren zitten nu vast aan de zijkant van de bus. Was ze drie keer met water om het bleekmiddel te verwijderen. Gebruik ten slotte een penseel om de eieren van de bus naar de flacons over te brengen om de ontwikkeling voort te zetten of voor onmiddellijk gebruik in een experiment. In het voorbeeldprotocol zullen we Drosophila-eieren onder steriele omstandigheden verzamelen en dechorioneren om vliegen met gedefinieerde microbiota op te eten.
- Plaats nylon gaas in een plastic bus om de zeef klaar te maken voor het verzamelen van eieren. Als dezelfde vliegen de volgende dag worden gebruikt, breng ze dan onmiddellijk over naar een nieuwe kooi met vers gegiste druivensap agar-borden. De druivensapplaat in de vorige kooi bevat de fruitvliegeieren. Verwijder dode vliegen met een schone kwast en wees voorzichtig om de agar niet te breken. Spoel de agar-plaat af met gedestilleerd water en borstel de eieren voorzichtig van het oppervlak van de agar en giet de slurry.
Steriliseer de bioveiligheidskast met 70% ethanol en zet vervolgens het UV-licht aan. Besproei alle niet-biologische benodigdheden met 70% ethanol en plaats ze onmiddellijk in de bioveiligheidskast en steriliseer ze vervolgens met UV-licht.
- Het is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat een goede aseptische techniek wordt beoefend bij het werken binnen of bij het toevoegen of verwijderen van nieuwe materialen aan de bioveiligheidskast.
- Breng de bus met de eieren over in een monsterbeker van 120 milliliter en giet langzaam 90 milliliter 0,6% natriumhypochlorietoplossing, of 7% bleekmiddel, in de bus, net onder de rand. Beweeg de bus met behulp van een tang periodiek op en neer in de oplossing om de eieren opnieuw te gebruiken. Breng de bus rechtstreeks over in een tweede monsterbeker die is voorgevuld met 90 milliliter bleekmiddel.
Aan het einde van de tweede bleekbehandeling moeten de eieren zich beginnen te hechten aan de zijkanten van de bus. Gooi het bleekmiddel weg en spoel de bus volledig af met steriel water. Nogmaals, gebruik een tang om het ei meerdere keren tijdens elke wasbeurt opnieuw te gebruiken. Aan het einde van de derde wasbeurt moeten de meeste eieren aan de zijkant van de bus worden bevestigd.
Breng met behulp van een steriele kwast de eieren van de zijkant van de bus over naar het steriele dieet. Laat de doppen los zodat zuurstof in de buis kan komen. De overgedragen eieren zijn zichtbaar op het oppervlak van het dieet.
