Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Lassen Sie Drosophila Über nacht Eier auf ein Gericht mit Agar legen, das mit Traubensaft ergänzt wird, um Eier zu visualisieren und mit Hefe überzogen zu machen, um Fliegen zu ermutigen, sich zu paaren und Eier zu legen. Um die Eier zu entfernen, fügen Sie destilliertes Wasser in die Schale und sanft wischen Sie die Oberfläche mit einem Pinsel. Dann gießen Sie die Mischung durch ein Nylon-Mesh in einem Kunststoff-Buchse platziert, um die Eier zu sammeln. Einweichen Sie die Eier in zwei Runden von 7% Bleichmittel, um die Chorion zu entfernen, oder schützende äußere Schicht, aus dem Embryo. Dieser Prozess wird Dechorionation genannt.
Die Eier sind nun an der Seite der Buchse kleben. Waschen Sie sie dreimal mit Wasser, um die Bleichmittel zu entfernen. Schließlich verwenden Sie einen Pinsel, um die Eier von der Buchse auf Fläschchen zu übertragen, um die Entwicklung fortzusetzen oder für den sofortigen Einsatz in einem Experiment. Im Beispielprotokoll werden wir Drosophila-Eier unter sterilen Bedingungen sammeln und dechorionate, um Fliegen mit definierter Mikrobiota zu hinterziehen.
- Legen Sie Nylongewebe in eine Kunststoffbuchse, um das Sieb für die Eiersammlung vorzubereiten. Wenn die gleichen Fliegen am nächsten Tag verwendet werden, übertragen Sie sie sofort in einen neuen Käfig mit frisch gehebebaren Traubensaft-Agar-Platten. Der Traubensaftteller im vorherigen Käfig enthält die Fruchtfliegeneier. Entfernen Sie tote Fliegen mit einem sauberen Pinsel, und seien Sie vorsichtig, den Agar nicht aufzubrechen. Spülen Sie den Agarteller mit destilliertem Wasser und bürsten Sie die Eier vorsichtig von der Oberfläche des Agars und gießen Sie dann die Gülle über das Geflecht.
Sterilisieren Sie den Biosicherheitsschrank mit 70% Ethanol und schalten Sie dann das UV-Licht ein. Sprühen Sie alle nicht-biologischen Vorräte mit 70% Ethanol und legen Sie sie sofort in den Biosicherheitsschrank, dann sterilisieren Sie sie mit UV-Licht.
- Es ist wichtig sicherzustellen, dass gute aseptische Technik bei der Arbeit innerhalb oder beim Hinzufügen oder Entfernen neuer Materialien in den Biosicherheitsschrank praktiziert wird.
- Die Buchse mit den Eiern in einen 120-Milliliter-Probenbecher geben und langsam 90 Milliliter 0,6% Natriumhypochloritlösung oder 7% Bleichmittel in die Buchse, knapp unterhalb des Rands, gießen.
Am Ende der zweiten Bleichbehandlung sollten die Eier beginnen, an den Seiten der Buchse zu haften. Entsorgen Sie die Bleiche und spülen Sie die Buchse vollständig mit sterilem Wasser ab. Verwenden Sie erneut Zangen, um das Ei mehrmals während jeder Wäsche wieder aufzuhängen. Am Ende der dritten Wäsche sollten die meisten Eier an der Seite der Buchse befestigt werden.
Mit einem sterilen Pinsel, übertragen Sie die Eier von der Seite der Buchse auf die sterile Ernährung. Lassen Sie die Kappen locker, damit Sauerstoff in die Röhre gelangen.
