Drosofilia Raccolta e dechorionation delle uova: un metodo per rimuovere lo strato di uova più esterno

- Consentire alla Drosophila di deporre le uova durante la notte su un piatto contenente agar integrato con succo d'uva per visualizzare le uova e ricoperto di lievito per incoraggiare le mosche ad accoppiarsi e deporre le uova. Per rimuovere le uova, aggiungere acqua distillata al piatto e pulire delicatamente la superficie con un pennello. Quindi versare il composto attraverso una rete di nylon posta in una boccola di plastica per raccogliere le uova. Immergere le uova in due tondi di candeggina al 7% per rimuovere il chorion, o strato esterno protettivo, dall'embrione. Questo processo è chiamato dechorionation.

Le uova sono ora attaccate al lato della boccola. Lavarle tre volte con acqua per rimuovere la candeggina. Infine, utilizzare un pennello per trasferire le uova dalla boccola alle fiale per continuare lo sviluppo o per un uso immediato in un esperimento. Nel protocollo di esempio raccoglieremo e dechorionate le uova di Drosophila in condizioni sterili per allevare mosche con microbiota definita.

- Posizionare la rete di nylon in una boccola di plastica per preparare il setaccio per la raccolta delle uova. Se le stesse mosche verranno utilizzate il giorno successivo, trasferirle immediatamente in una nuova gabbia contenente piatti di agar di succo d'uva appena lievitati. Il piatto di succo d'uva nella gabbia precedente contiene le uova di mosca della frutta. Rimuovere le mosche morte con un pennello pulito e fare attenzione a non rompere l'agar. Sciacquare il piatto di agar con acqua distillata e spazzolare delicatamente le uova dalla superficie dell'agar, quindi versare il liquame sulla rete per raccogliere le uova.

Sterilizzare l'armadio di biosicurezza con il 70% di etanolo, quindi accendere la luce UV. Spruzzare tutte le forniture non biologiche con il 70% di etanolo e posizionarle immediatamente nell'armadio di biosicurezza, quindi sterilizzarle con luce UV.

- È fondamentale garantire che una buona tecnica aseptica sia praticata quando si lavora all'interno o quando si aggiungono o si rimuovono nuovi materiali nell'armadio di biosicurezza.

- Trasferire la boccola con le uova in una tazza di campione da 120 millilitri e versare lentamente 90 millilitri di soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,6%, o candeggina al 7%, nella boccola, appena sotto il bordo. Utilizzando le forcep, spostare periodicamente la boccola su e giù nella soluzione per rimescolare le uova. Trasferire la boccola direttamente in una tazza di secondo campione preriempita con 90 millilitri di candeggina.

Al termine del secondo trattamento con candeggina, le uova dovrebbero iniziare ad aderire ai lati della boccola. Scartare la candeggina e sciacquare completamente la boccola con acqua sterile. Ancora una volta, utilizzare le fusa per rimescolare l'uovo più volte durante ogni lavaggio. Entro la fine del terzo lavaggio, la maggior parte delle uova dovrebbe essere attaccata al lato della boccola.

Utilizzando un pennello sterile, trasferire le uova dal lato della boccola alla dieta sterile. Lasciare i tappi sciolti per consentire all'ossigeno di entrare nel tubo. Le uova trasferite saranno visibili sulla superficie della dieta.