Дрозофила Коллекция яиц и дехорионация: метод удаления внешнего яичного слоя

- Разрешить Drosophila откладывать яйца на ночь на блюдо, содержащее агар, дополненный виноградным соком, чтобы визуализировать яйца и покрытые дрожжами, чтобы поощрять мух спариваться и откладывать яйца. Чтобы удалить яйца, добавьте дистиллированную воду в блюдо и аккуратно протрите поверхность кистью. Затем залейте смесь через нейлоновую сетку, помещенную в пластиковый куст для сбора яиц. Замочите яйца в два раунда по 7% отбеливателя, чтобы удалить хорион, или защитный слой, из эмбриона.

Яйца теперь прилипли к стороне кустов. Мыть их три раза водой, чтобы удалить отбеливатель. Наконец, использовать кисть для передачи яиц из куста во флаконы для продолжения развития или для немедленного использования в эксперименте. В примере протокола, мы будем собирать и дехорионат Drosophila яйца в стерильных условиях для задней мух с определенной микробиоты.

- Поместите нейлоновую сетку в пластиковый куст, чтобы подготовить сито для сбора яиц. Если те же мухи будут использоваться на следующий день, немедленно перенесите их в новую клетку, содержащую свежеприготовленный виноградный сок агар пластины. Виноградная плита сока в предыдущей клетке содержит яйца плодовой мухи. Удалить мертвых мух с чистой кистью, и будьте осторожны, чтобы не разбить агар. Промыть агар пластины с дистиллированной водой и аккуратно чистить яйца с поверхности агара затем залить

Стерилизовать шкаф биобезопасности с 70% этанола затем включить ультрафиолетовый свет. Спрей все не биологические материалы с 70% этанола и сразу же поместить их в шкаф биобезопасности, а затем стерилизовать их с ультрафиолетовым светом.

- Крайне важно обеспечить, чтобы хорошая асептическая техника практикуется при работе в рамках или при добавлении или удалении новых материалов в шкаф биобезопасности.

- Передача кустов с яйцами в 120-миллилитровый образец чашки и медленно залить 90 миллилитров 0,6% гипохлоритного раствора натрия, или 7% отбеливателя, в кусты, чуть ниже обода. Использование миппов, периодически перемещать кусты вверх и вниз в растворе, чтобы повторно использовать яйца. Передача кустов непосредственно во второй образец чашки предварительно заполнены 90 миллилитров отбеливателя.

В конце второй обработки отбеливателя, яйца должны начать придерживаться стороны куста. Отбросьте отбеливатель и полностью промыть кусты стерильной водой. Опять же, использовать типсы, чтобы повторно использовать яйцо несколько раз во время каждой стирки.

Используя стерильную кисть, перенесите яйца со стороны кустов на стерильную диету. Оставьте колпачки свободными, чтобы кислород вошел в трубку.