Encyclopedia of Experiments: Biology
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- En primer lugar, recoger moscas en la etapa deseada de desarrollo y colocarlas en un tubo estéril. Para contar sólo la microbiota interna, esterilizar el exterior de las moscas sumergiéndolas en un 70% de etanol. Para medir tanto la microbiota interna como externa, saltarse este paso de esterilización.
Ahora debe tener una mezcla homogénea que contenga bacterias que puedan cultivar.
En el protocolo de ejemplo, inocularemos moscas estériles con un cultivo bacteriano gnotobiótico o definido y recogeremos y mediremos las UNIDADES DE CFU.
- Utilizar puntas de filtro para transferir 100 microlitros de crecimiento nocturno a un tubo de microcombustible estéril.
Después de obtener el OD600, retire el sobrenadante con una punta de pipeta y utilice mMRS fresco para volver a suspender el pellet. Mezcle las cepas bacterianas diluidas en proporciones iguales para crear un cóctel multi-especie. Transferir 50 microlitros del cóctel a los tubos cónicos que contienen la dieta estéril y los huevos desocupados.
Para medir las Unidades de Formación de Colonias o CFUs, transfiera cinco moscas a un tubo de microfugio de 1.7 mililitros que contiene 125 microlitros de cuentas cerámicas y 125 microlitros de caldo mMRS. Homogeneizar las moscas usando un homogeneizador de tejido. No debe haber piezas enteras la mosca restante. A continuación, diluir el homogeneizado con 875 microlitros de mMRS, vórtice el homogeneizado durante cinco segundos, y pipeta 120 microlitros en el primer pozo de una placa de microtíter.
Retire 10 microlitros del primer pozo y agréguelo al segundo pozo que contiene 70 microlitros de MRS. Mezcle el contenido del segundo bien a fondo. A continuación, transfiera 10 microlitros del segundo pozo al tercer pozo que contenga 70 microlitros de MRS, y mezcle bien. Transfiera 10 microlitros de cada dilución a una placa mMRS. Incline ligeramente el plato para extender la dilución varios milímetros por la superficie del agar y permitir que el líquido se seque antes de mover la placa. Retire las placas de la incubadora una vez que las colonias individuales distintas sean visibles y contarlas de una dilución con 10 a 100 colonias aisladas.
