蛍光顕微鏡用昆虫脚の処理:イメージングのための神経筋構造を保存する方法

- まず、70%エタノール溶液中に麻酔付き昆虫を水没させてキューティクルの疎水性を低下させ、その後、少なくとも30分間洗剤を含むリン酸緩衝生理食塩水で組織を洗浄し、浸透させ、固定中に組織浸透を可能にする。

次に、胸郭から頭と腹部を取り除き、鉗子を使ってコサ胸部接合部に穏やかな圧力をかけ、脚を取り外します。

次いで、固定溶液を取り除き、洗浄剤を含むリン酸緩衝生理食塩水で組織を数回洗浄します。

最後に、脚を取り付け媒体のドロップに取り付けます。顕微鏡スライドとカバースリップの間にスペーサーを使用して標本が損傷するのを防ぎ、マニキュアでマウントを固定します。

次の例では、ショウジョウバエメラノガスター脚の解剖、固定、および取り付けが見られます。

-ガラスのマルチウェルプレートに適切な数の井戸を70%エタノールで充填することで始めます。ブラシを使用して、各井戸に年齢や性別を持つ15〜20個の二酸化炭素麻酔ハエを加え、完全に水没するまでハエをエタノールにそっとまさかします。

1分以上後、洗浄ごとに少なくとも10分間、リン酸緩衝生理食塩水中に0.3%の非イオン性界面活性剤溶液でハエを3回洗い流します。 最後の洗浄後、胸部セグメントや脚を損傷することなく、各フライの頭と腹部を取り除くために鉗子を使用し、一対の細かい鉗子の先端を使用して、コクサ胸部接合部に穏やかにしっかりと圧力をかけ、胸部セグメントから片脚を取り外します。

氷の上に準備した新しい4%パラホルムアルデヒドを含む新しいマルチウェルプレートの1つの井戸に脚を置き、摂氏4度で一晩インキュベーションします。

-脚を浮かべずに固定バッファに優しく押し込んで、足を固定して得ることが重要です。

- 翌日、1回20分間、新鮮な0.3%非イオン界面活性剤洗剤溶液で脚を5回洗います。

翌日、ガラス顕微鏡スライドのコーティングされた端の隣に約20マイクロリットルのグリセロールを加え、グリセロールを22 x 22ミリのカバースリップで覆います。

細かい鉗子を使用して、マルチウェルプレートから1本の脚を媒体のドロップで、外付けの上下方向の取り付け媒体の10マイクロリットルストリップに移します。