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为免疫维护准备固定 的果蝇 卵母细胞:修复和去除外膜的高通量方法

 
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为免疫维护准备固定 的果蝇 卵母细胞:修复和去除外膜的高通量方法

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- 首先在搅拌机脉动麻醉的果蝇缓冲器,将苍蝇分解块。通过网格过滤混合物去除身体部位。然后,鸡蛋下沉而较大的碎片留在表面可以去除。

使用较小的网格重复过程清除其他碎屑。 鸡蛋收集小瓶如果鸡蛋药物治疗请此时进行处理。 接下来,取出液体固定物代替加入己烷帮助固定物穿透鸡蛋周围的

然后,PBS洗去固定物。 染色卵母细胞,请取出保护性以便抗体穿透。卵母细胞玻璃滑梯磨砂部分。 将盖片放在鸡蛋,然后来回运动轻轻滚动盖片机械地卵子紫水晶鸡蛋分离出来 卵母细胞现在准备好染色。

示例协议中,我们将准备肌瘤I 中的卵母细胞,以染色可视化主轴设备。

- 首先,PTB预切5毫升巴斯德移液器的内部以防止卵母细胞粘在表面。搅拌机中加入100毫升Rob的缓冲器然后加入100300只麻醉苍蝇秒钟脉冲

通过 1500 微米的格将由此产生的泥浆过滤 250毫米烧嘴过滤片沉淀分钟然后吸气层,去除尽可能多的身体部位 通过径为300微米的较小再次泥浆过滤250 毫升烧嘴

涂层移液器使用额外的缓冲器冲洗第一个烧杯,以收集剩余卵母细胞。 泥浆沉淀分钟然后吸气底部10毫升外的所有 将尽可能多的 10 毫升涂层5 毫升泥浆沉淀分钟然后小心地去除液体。

加入剩余10毫升泥浆混合物去除液体之前再次稳定下来 使用涂层移液器中的额外缓冲烧杯剩余卵母细胞冲洗剂5 毫升沉淀分钟。

修复卵巢,首先,组织的所有液体立即添加1毫升固定组合。 组织放在坚果钟。接下来,加入1毫升六氯烷,使管子旋转分钟然后卵母细胞沉淀分钟。

固定的组织中取出所有液体然后加入1毫升1倍PBS。将管子漩涡30秒,然后卵母细胞沉淀分钟。之后管中取出所有液体5毫升1XPBS填充

使用涂层移液器,磨砂玻璃滑梯上加入大约 500 1,000 卵母细胞使用钳子去除任何无关的身体部位材料。 在组织顶部放置轻轻滚动卵母细胞,直到取出所有 盖片边缘卵母细胞效果良好。 定期检查显微镜去除的进度压力太大破坏卵母细胞。

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空值,问题,
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