Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- התחל על ידי drosophila מורדם פועם יחד עם חיץ בבלנדר כדי לשבור זבובים לחתיכות קטנות.
חזור על תהליך זה באמצעות רשת קטנה יותר כדי להסיר פסולת נוספת. לאסוף את הביצים בקבוקון, ואם הביצים יש לטפל בתרופה, לעשות זאת בשלב זה.
לאחר מכן, לשטוף את הקיבוע עם PBS. כדי להכתים את הביציות, להסיר את הקרומים החיצוניים מגן כדי לאפשר חדירת נוגדנים. פיפט הביציות על החלק הקפוא של שקופית זכוכית.
בפרוטוקול הדוגמה, נכין ביציות במיוזיס אני כדי להכתים ולדמיין את מנגנון הציר.
- כדי להתחיל, לחתוך מראש את החלק הפנימי של צינור 5 מיליליטר ופסטר פיפטה עם PTB כדי למנוע ביציות נדבק למשטחים.
סנן את תרחיף וכתוצאה מכך לתוך כוס 250 מיליליטר דרך רשת גדולה עם נקבוביות של כ 1500 מיקרומטר.
לשטוף את הכומתה הראשונה באמצעות חיץ נוסף פיפטה מצופה כדי לאסוף את ביציות הנותרות.
מוסיפים את שארית 10 מיליליטר של תרחיף ולתת את התערובת להתיישב שוב לפני הסרת הנוזל.
כדי לתקן את השחלות, ראשית, לשאוף את כל הנוזלים מן הרקמות, ומיד להוסיף 1 מיליליטר של תערובת לתקן.
הסר את כל הנוזלים מהרקמה התיישבה, ולאחר מכן להוסיף 1 מיליליטר של 1x PBS. וורטקס הצינור במשך 30 שניות, ולאחר מכן לאפשר ביציות להסתפק דקה אחת. לאחר מכן, להסיר את כל הנוזלים מהצינור ולמלא אותו עם חמישה מיליליטר של 1x PBS.
באמצעות פיפטה מצופה, להוסיף בערך 500 עד 1,000 ביציות למגלשת זכוכית חלבית. הסר את כל חלקי הגוף או החומר החיצוניים באמצעות מלקחיים.
