Sporing frit walking fluer: en metode til at vurdere bevægelse i Drosophila

- Brug en overdækket arena- for eksempel en petriskål fyldt med klar silikone - for at sikre fluer kan gå frit, men er ude af stand til at flyve inde i arenaen, når den er dækket.

Med låget åbent, overføre bedøvede fluer ind i skålen, dække det og give emnerne mulighed for at komme sig. Fluer vil bevæge sig frit rundt i arenaen under retssagen. For at vurdere bevægelse skal du spore placeringen af hver flue over tid og beregne parametre, der karakteriserer bevægelse, såsom afstand, der er tilbagelagt af hver flue. I dette eksempelprotokol vil vi se en demonstration af analysens opsætning og analyse ved hjælp af videosporingssoftware.

- For at spore flyvebevægelser i en petriskål skal du først fylde en 6 centimeter skål med gennemsigtig silikoneeelastomer for at gøre sporingsarenaen. Lad et 3 millimeter mellemrum mellem silikonen og låget, så fluer kan gå frit i hullet, men ikke tage flugten. Under sporingsarenaen har du en hvid baggrund.

Derefter bedøver fire fluer fra den samme behandlingsgruppe og placerer dem i arenaen. Lad fluerne akklimatisere sig i en time til arenaen, som skal være fuldt oplyst og ved ca. 22 grader Celsius, ikke varmere end stuetemperatur. Efter en time skal du bruge et opladningskoblet enhedskamera placeret over arenaen for at registrere fluens aktivitet i 5 minutter.

Efter 5-minutters optagelse, bedøve fluer i arenaen og returnere dem til et nyt hjem hætteglas. Derefter bortskaffe arenaen. Senere analysere optagelserne ved hjælp af frit tilgængelige Ctrax software. Denne software genererer sporingsdata, som kan eksporteres i et programmerbart sprog-kompatibelt format, såsom MATLAB format.

Ud fra dataene beregnes den tilbagelagte afstand pr. ramme, den gennemsnitlige gåafstand for hver flue og den gennemsnitlige tilbagelagte afstand pr. flue. For statistisk signifikans kan du forvente at teste omkring 100 fluer pr. behandlingsgruppe.