Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Gebruik een overdekte arena-- bijvoorbeeld een Petrischaal gevuld met heldere siliconen-- om ervoor te zorgen dat vliegen vrij kunnen lopen, maar niet in staat zijn om in de arena te vliegen wanneer deze bedekt is. Plaats de schotel op een wit verlicht oppervlak en plaats een camera direct erboven.
Met het deksel open, breng verdoofde vliegen over in de schotel, bedek het en laat de proefpersonen herstellen. Vliegen zullen zich tijdens de proef vrij door de arena bewegen. Om de voortbeweging te beoordelen, volgt u de positie van elke vlieg in de loop van de tijd en berekent u parameters die de voortbeweging kenmerken, zoals de afstand die door elke vlieg wordt afgelegd. In dit voorbeeldprotocol zien we een demonstratie van de opstelling en analyse van de test met behulp van videotrackingsoftware.
- Om vliegbewegingen in een Petrischaal te volgen, vult u eerst een schaal van 6 centimeter met transparant siliconen elastomeer om de trackingarena te maken. Laat een opening van 3 millimeter tussen de siliconen en het deksel, zodat vliegen vrij in de opening kunnen lopen, maar geen vlucht kunnen nemen. Onder de trackingarena heeft u een witte achtergrond.
Verdoof vervolgens vier vliegen uit dezelfde behandelingsgroep en plaats ze in de arena. Laat de vliegen een uur wennen aan de arena, die volledig verlicht moet zijn en bij ongeveer 22 graden Celsius, niet heter dan kamertemperatuur. Gebruik na een uur een camera met oplaadkoppeling boven de arena om de activiteit van de vlieg gedurende 5 minuten op te nemen.
Na de opname van 5 minuten verdoven we de vliegen in de arena en brengen ze terug naar een nieuwe huisflacon. Gooi vervolgens de arena weg. Analyseer later de opnames met behulp van de vrij beschikbare Ctrax-software. Deze software genereert trackinggegevens, die kunnen worden geëxporteerd in een programmeerbaar taalcompatibel formaat, zoals het MATLAB-formaat.
Bereken uit de gegevens de afgelegde afstand per frame, de gemiddelde loopafstand voor elke vlieg en de gemiddelde afgelegde afstand per vlieg. Verwacht voor statistische significantie ongeveer 100 vliegen per behandelingsgroep te testen.
