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Encyclopedia of Experiments: Biology

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Suivre les mouches qui marchent librement

 
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Suivre les mouches qui marchent librement : une méthode pour évaluer la locomotion à Drosophila

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- Utilisez une arène couverte - par exemple, une boîte de Pétri remplie de silicone clair - pour vous assurer que les mouches peuvent marcher librement, mais sont incapables de voler à l’intérieur de l’arène quand il est couvert. Placez le plat sur une surface blanche illuminée et placez une caméra directement au-dessus.

Le couvercle étant ouvert, transférez des mouches anesthésiées dans le plat, couvrez-le et permettez aux sujets de récupérer. Les mouches se déplaceront librement autour de l’arène pendant l’essai. Pour évaluer la locomotion, suivre la position de chaque vol au fil du temps et calculer les paramètres qui caractérisent la locomotion, comme la distance parcourue par chaque mouche. Dans ce protocole d’exemple, nous verrons une démonstration de la configuration et de l’analyse des analyses à l’aide d’un logiciel de suivi vidéo.

- Pour suivre les mouvements des mouches dans une boîte de Petri, remplissez d’abord un plat de 6 centimètres d’élastomer transparent en silicone pour faire l’arène de suivi. Laissez un espace de 3 millimètres entre le silicone et le couvercle, afin que les mouches puissent marcher librement dans l’espace, mais ne pas prendre leur envol. Sous l’arène de suivi, avoir un fond blanc.

Ensuite, anesthésiez quatre mouches du même groupe de traitement et placez-les dans l’arène. Laissez les mouches s’acclimater pendant une heure à l’aréna, qui doit être entièrement éclairé et à environ 22 degrés Celsius, pas plus chaud que la température ambiante. Après une heure, utilisez une caméra couplée à la charge placée au-dessus de l’arène pour enregistrer l’activité de la mouche pendant 5 minutes.

Après l’enregistrement de 5 minutes, anesthésiez les mouches dans l’arène et retournez-les dans un nouveau flacon d’accueil. Puis, disposez-vous de l’arène. Plus tard, analysez les enregistrements à l’aide du logiciel Ctrax librement disponible. Ce logiciel génère des données de suivi, qui peuvent être exportées dans un format compatible langage programmable, tel que le format MATLAB.

À partir des données, calculer la distance parcourue par image, la distance de marche moyenne pour chaque vol et la distance moyenne parcourue par mouche. Pour une importance statistique, attendez-vous à tester environ 100 mouches par groupe de traitement.

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