Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Use uma arena coberta- por exemplo, uma placa de Petri cheia de silicone claro - para garantir que as moscas possam andar livremente, mas são incapazes de voar dentro da arena quando estiver coberta. Coloque a placa em uma superfície branca iluminada e posicione uma câmera diretamente acima.
Com a tampa aberta, transfira moscas anestesiadas para o prato, cubra-a e permita que os sujeitos se recuperem. As moscas se movem livremente ao redor da arena durante o ensaio. Para avaliar a locomoção, rastreie a posição de cada mosca sobre o tempo e calcule parâmetros que caracterizam a locomoção, como a distância percorrida por cada mosca. Neste protocolo de exemplo, veremos uma demonstração da configuração e análise do ensaio usando software de rastreamento de vídeo.
- Para acompanhar os movimentos de moscas em uma placa de Petri, primeiro, preencha uma placa de 6 centímetros com elastômero de silicone transparente para fazer a arena de rastreamento. Deixe uma distância de 3 milímetros entre o silicone e a tampa, para que as moscas possam andar livremente na abertura, mas não voar. Sob a arena de rastreamento, tenha um fundo branco.
Em seguida, anestesia quatro moscas do mesmo grupo de tratamento e coloque-as na arena. Deixe as moscas se aclimatarem por uma hora até a arena, que deve ser totalmente iluminada e a cerca de 22 graus Celsius, não mais quente que a temperatura ambiente. Após uma hora, use uma câmera de dispositivo acoplada a carga posicionada acima da arena para registrar a atividade da mosca por 5 minutos.
Após a gravação de 5 minutos, anestesiar as moscas na arena e devolvê-las para um novo frasco doméstico. Em seguida, descarte a arena. Mais tarde, analise as gravações usando o software Ctrax disponível livremente. Este software gera dados de rastreamento, que podem ser exportados em um formato compatível com linguagem programável, como o formato MATLAB.
A partir dos dados, calcule a distância percorrida por quadro, a distância média de caminhada para cada mosca e a distância média percorrida por mosca. Para significância estatística, espere testar cerca de 100 moscas por grupo de tratamento.
