Serbestçe Yürüyen Sinekleri İzleme: Drosophila'da Locomotion'ı Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

- Kapalı bir arena kullanın -- örneğin, berrak silikonla dolu bir Petri kabı-- sineklerin serbestçe yürüyebilmesini sağlamak için, ancak kaplandığında arenanın içinde uçamazlar.

Kapak açıkken, uyuşturulmış sinekleri çanağa aktarın, örtün ve deneklerin iyileşmesine izin verin. Sinekler deneme sırasında arenada serbestçe hareket edecektir. Locomotion'ı değerlendirmek için, zaman içinde her bir uçuşun konumunu izleyin ve her sinek tarafından kat edilen mesafe gibi hareket etmeyi karakterize eden parametreleri hesaplayın. Bu örnek protokolde, video izleme yazılımı kullanarak tahlil kurulumu ve analizinin bir gösterimini göreceğiz.

- Petri kabındaki sinek hareketlerini izlemek için, önce, izleme arenasını yapmak için 6 santimetrelik bir kabı şeffaf silikon elastomer ile doldurun. Silikon ve kapak arasında 3 milimetrelik bir boşluk bırakın, böylece sinekler boşlukta serbestçe yürüyebilir, ancak uçuşa geçemez. İzleme arenasının altında beyaz bir arka plana sahip olun.

Daha sonra, aynı tedavi grubundan dört sineği uyuşturun ve arenaya yerleştirin. Sineklerin, oda sıcaklığından daha sıcak olmayan, tamamen aydınlatılması gereken ve yaklaşık 22 santigrat derecede arenaya bir saat boyunca alışmasına izin verin. Bir saat sonra, 5 dakika boyunca sineğin aktivitesini kaydetmek için arenanın üzerine yerleştirilmiş şarj bağlantılı bir cihaz kamerası kullanın.

5 dakikalık kayıttan sonra, arenadaki sinekleri uyuşturun ve yeni bir ev şişesine geri döndürün. Sonra, arenayı atın. Daha sonra, özgürce kullanılabilen Ctrax yazılımını kullanarak kayıtları analiz edin. Bu yazılım, MATLAB formatı gibi programlanabilir dil uyumlu bir formatta dışa aktarılabilen izleme verileri üretir.

Verilerden, kare başına kat edilen mesafeyi, her sinek için ortalama yürüme mesafesini ve sinek başına kat edilen ortalama mesafeyi hesaplayın. İstatistiksel önem için, tedavi grubu başına yaklaşık 100 sinek test etmeyi bekleyin.