Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Pour commencer, pipette une goutte de tampon sur un tampon de dissecting propre. Ensuite, placez une larve vivante séchée sur la gouttelette. Drosophila, comme d’autres arthropodes, dispose d’un système circulatoire ouvert dans lequel le cœur pompe l’hémolympe autour du corps, baigne les organes internes. Pour libérer l’hémolymph, qui est le sang combiné et le liquide interstitiel des arthropodes, utilisez des forceps et ouvrez la cuticule, la couverture externe semi-rigide des larves.
Ensuite, jetez la carcasse et transférez la solution d’hémolympe de la plaque dissectante à la solution tampon réfrigérée dans un tube de microcentrifugeuse. Enfin, utilisez un hémocytomètre pour compter le nombre d’hémocytes, les cellules dans le hemolymph, qui ont été recueillies. Dans ce protocole, nous recueilleons le hemolymph des larves de Drosophila melanogaster.
- Commencer la collecte de l’hémolympe en ajoutant 10 microlitres de 1x PBS à un tube de microcentrifugeuse, et en plaçant le tube sur la glace. Ensuite, placez une goutte de 10 microlitres de 1x PBS sur un tampon de dissection propre. Sélectionnez une larve individuelle, et séchez-la en la plaçant sur un lingette de tissu. Puis transférez-la à la gouttelette de PBS sur le tampon de dissection.
À l’aide de forceps, ouvrir délicatement et inverser la cuticule pour libérer l’hémolymph, puis jeter la carcasse. Avec une pipette, recueillir l’hémolympe de la garniture dissective. Ajouter le hémolymph au tube de microcentrifugeuse PBS glacé, et mélanger en pipetant de haut en bas. Charger 10 microlitres de l’échantillon dans une chambre de micromocytomètre et prendre une concentration de lecture.
