Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For å starte, pipette en dråpe buffer på en ren dissekeringspute. Legg deretter en tørket levende larve på dråpen. Drosophila, som andre leddyr, har et åpent sirkulasjonssystem der hjertet pumper hemolymfe rundt kroppen, bader de indre organene. For å frigjøre hemolymfen, som er det kombinerte blodet og interstitialvæsken til leddyr, bruk tang og åpne kutiklet, det halvstive ytre dekket av larver.
Kast deretter slaktkroppen og overfør hemolymfløsningen fra dissekeringsplaten til kjølt bufferløsning i et mikrocentrifugerør. Til slutt, bruk et hemocytometer for å telle antall hemocytter, cellene i hemolymfen, som ble samlet inn. I denne protokollen vil vi samle hemolymfe fra Drosophila melanogaster larver.
- Begynn hemolymfoppsamlingen ved å legge til 10 mikroliter 1x PBS i et mikrocentrifugerør og plassere røret på is. Deretter legger du en 10 mikroliterdråpe 1x PBS på en ren dissekeringspute. Velg en individuell larve, og tørk den ved å plassere den på en vevsserviett. Deretter overfører du den til PBS-dråpen på disseksjonsputen.
Bruk tang, riv forsiktig opp og inverter kutiklet for å frigjøre hemolymfen, og kast deretter slaktkroppen. Med en pipette samler du hemolymfen fra dissekeringsputen. Legg hemolymfen til det islagte PBS mikrocentrifugerøret, og bland ved pipettering opp og ned. Last 10 mikrolitere av prøven inn i et hemocytometerkammer og ta en konsentrasjonsavlesning.
