Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Başlamak için, temiz bir diseksiyon pedi üzerine bir damla tampon pipet. Daha sonra, damlacığın üzerine kurutulmuş bir canlı larva yerleştirin. Drosophila, diğer eklembacaklılar gibi, kalbin iç organları yıkayan vücudun etrafına hemolimf pompaladığı açık bir dolaşım sistemine sahiptir. Eklembacaklıların kombine kan ve interstisyel sıvısı olan hemolimf'i serbest bırakmak için, kümesleri kullanın ve larvaların yarı sert dış kaplaması olan kütikül açın.
Daha sonra karkası atın ve hemolimf çözeltisini diseksiyon plakasından bir mikrosantrifüj tüpündeki soğutulmuş tampon çözeltisine aktarın. Son olarak, toplanan hemositlerin, hemolimfteki hücrelerin sayısını saymak için bir hemositometre kullanın. Bu protokolde, Drosophila melanogaster larvalarından hemolimf toplayacağız.
- Bir mikrosantrifüj tüpüne 10 mikrolitre 1x PBS ekleyerek ve tüpü buza yerleştirerek hemolimf koleksiyonuna başlayın. Sonra, temiz bir diseksiyon pedi üzerine 1x PBS'lik 10 mikrolitrelik bir damla yerleştirin.
Mantoları kullanarak, hemolimfi serbest bırakmak için kütikülleri hafifçe yırtın ve ters çevirin ve ardından karkası atın. Bir pipetle, kesme yastığından hemolimfi toplayın. Hemolimf'i buzlu PBS mikrosantrifüj tüpüne ekleyin ve yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın.
