Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Om te beginnen, zet een fruitvlieg pop dorsaal, of terug, kant naar boven. Verwijder het operculum of het voorste uiteinde van de pop om het hoofd van het dier bloot te stellen. Blijf de pop openen door het snijden en afpellen van de behuizing. Eenmaal bevrijd, bedek de ontleedde pop met PBS om uitdroging te voorkomen. Maak een schone, dwarsdoorsnede door de thorax en verwijder het achterste deel van het karkas.
Om het oog-hersencomplex bloot te leggen, dat de twee netvliezen omvat die aan de optische kwabben zijn bevestigd, begint u het epitheel van de opengesneden rand van de thorax te scheuren en blijft u de hoofdcapsule geleidelijk openen. Leid vervolgens voorzichtig het oog-hersencomplex weg van de overblijfselen van de hoofdcapsule.
In het voorbeeldprotocol zien we een demonstratie van een popoog-hersendissectie die wordt gebruikt om weefsel te isoleren voor verschillende downstream-analyses.
- Nadat u de Drosophila-pop op een zwarte dissectieschaal hebt geplaatst, legt u een vers stuk dubbelzijdige tape op de dissectieschaal uit de buurt van de poppen en gebruikt u een tang om de popdorsale kant voorzichtig op de tape te plaatsen.
Plaats de schaal onder een stereomicroscoop en gebruik een tang om het operculum van elke pop te verwijderen. Gebruik een microdissectieschaar om elke popbehuizing te snijden, zodat deze opengeklapt kan worden om het hoofd, de thorax en het voorste buiksegment te onthullen en de randen van de popbehuizing vast te zetten aan de dubbelzijdige tape.
Doorboor de buik van elke pop met een scherpe tang en verwijder de pop uit de poppenkast. Plaats de pop op de dissectieschaal weg van de tape en bedek de pop met 400 microliters ijskoude PBS. Gebruik de tang om ze allemaal bij de buik vast te pakken en gebruik de microdissection schaar om een schone dwarsdoorsnede door de thorax te maken en snijd de poppen doormidden.
Pak met behulp van twee paar fijne tangen de snijranden van elk thoraxepitheel vast en scheur geleidelijk de thorax en hoofdcapsule open, waardoor het oog-hersencomplex in het omringende vetweefsel wordt blootgelegd. Gebruik vervolgens, zonder het weefsel vast te pakken, de tang om elk doorschijnend, off-white, haltervormig oog-hersencomplex weg te leiden van de overblijfselen van de hoofdcapsule.
