Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Um zu beginnen, sichern Sie eine Fruchtfliege pupa dorsal, oder zurück, Seite nach oben. Entfernen Sie das Operculum oder das vordere Ende der Pupa, um den Kopf des Tieres zu entblößen. Weiter zu öffnen, indem Sie das Gehäuse schneiden und wegschälen. Einmal befreit, decken Sie die sezierte Pupa mit PBS, um Austrocknung zu vermeiden. Machen Sie einen sauberen, querschnittsigen Schnitt durch den Brustkorb und entfernen Sie den Hinterteil des Wagens.
Um den Augen-Hirn-Komplex, der die beiden an den optischen Lappen befestigten Netzhaut umfasst, auszusetzen, beginnen Sie, das Epithel vom schnittoffenen Rand des Thorax zu reißen und die Kopfkapsel nach und nach zu öffnen.
Im Beispielprotokoll wird eine Demonstration einer pupalen Augen-Hirn-Sektion zu sehen, die verwendet wird, um Gewebe für verschiedene nachgelagerte Analysen zu isolieren.
- Nachdem Sie die Drosophila-Pupae auf eine schwarze Sezierende Schale gelegt haben, legen Sie ein frisches Stück doppelseitiges Klebeband auf die Sezierende Schale weg von den Pupas und verwenden Sie ein Paar Zangen, um die dorsale Seite der Welpen vorsichtig auf das Band zu legen.
Legen Sie die Schale unter ein Stereomikroskop und verwenden Sie Zangen, um das Operculum jeder Pupa zu entfernen. Verwenden Sie mikrodissektionenschere, um jedes Pupalgehäuse zu schneiden, so dass es geöffnet werden kann, um den Kopf, Thorax und das vordere Bauchsegment zu offenbaren und die Ränder des Pupalgehäuses auf dem doppelseitigen Band zu sichern.
Pierce den Bauch jeder Pupa mit scharfen Zangen und entfernen Sie die Pupa aus seinem Pupal-Gehäuse. Legen Sie die Pupa auf die Sezierschale weg vom Band, und bedecken Sie die Pupa mit 400 Mikroliter eiskalten PBS. Verwenden Sie Zangen, um jede einzelne durch den Bauch zu greifen, und verwenden Sie die MikrodissektionSchere, um einen sauberen Querschnittsschnitt durch die Brust zu machen.
Greifen Sie mit zwei Paaren feiner Zangen die Schnittkanten jedes Thoraxepithels und reißen Sie nach und nach die Thorax- und Kopfkapsel auf und entlarven Sie den Augen-Hirn-Komplex im umgebenden Fettgewebe. Verwenden Sie dann Zangen, ohne das Gewebe zu erfassen, um jeden transluzenten, off-white, hantelförmigen Augenhirnkomplex von den Resten der Kopfkapsel wegzuführen.
