Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til å begynne med, sikre en fruktflue pupa dorsal, eller tilbake, side opp. Fjern operculum eller den fremre enden av puppen for å eksponere dyrets hode. Fortsett å åpne puppen ved å kutte og skrelle bort foringsrøret. Når du er frigjort, dekk den dissekerte puppen med PBS for å unngå uttørking. Lag et rent, tverrsnittssnitt gjennom thoraxen og fjern den bakre delen av slaktkroppen.
For å eksponere øye-hjerne-komplekset, som inkluderer de to netthinnene festet til optiske lober, begynn å rive epitelet fra den skjære åpne kanten av thoraxen og fortsett å åpne hodekapselen gradvis. Deretter må du forsiktig lede øye-hjernekomplekset bort fra restene av hodekapselen.
I eksempelprotokollen vil vi se en demonstrasjon av en pupal øye-hjerne-disseksjon som brukes til å isolere vev for ulike nedstrømsanalyser.
- Etter å ha plassert Drosophila-pupaen på en svart dissekeringsfat, legg et nytt stykke dobbeltsidig tape på dissekeringsfatet vekk fra puppene og bruk et par tang for å forsiktig plassere pupae dorsalsiden opp på båndet.
Plasser parabolen under et stereomikroskop og bruk tang til å fjerne operkulumet til hver pupa. Bruk mikrodeseksjonssaks til å kutte hvert valpekasse, slik at det kan flappes åpen for å avsløre hodet, thoraxen og det fremre buksegmentet, og fest kantene på puppehuset til det dobbeltsidige båndet.
Pierce magen til hver pupa med skarpe tang og fjern puppen fra puppetuiet. Plasser puppen på disseksjonsfatet bort fra båndet, og dekk puppen med 400 mikroliter iskald PBS. Bruk tang til å gripe hver enkelt ved magen, og bruk mikrodesisseksjonssaksen til å lage et rent tverrsnitt gjennom thoraxen, kutte puppene i halvparten.
Bruk to par fine tang, ta tak i de kuttede kantene på hvert thorax-epitel og gradvis rive opp thoraxen og hodekapselen, og eksponere øye-hjernekomplekset i det omkringliggende fettvevet. Deretter, uten å gripe vevet, bruk tang for å lede hvert gjennomsiktig, off-white, hantelformet øye-hjernekompleks vekk fra restene av hodekapselen.
