Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Na mosca adulta, os músculos de voo indiretos, ou IFMs, são os maiores músculos da mosca abrangendo todo o tórax. Os IFMs orquestram os movimentos característicos de asas de alta frequência em moscas de duas asas, incluindo Drosophila. Dois grupos de fibra muscular oposta compõem os IFMs.
Primeiro, os músculos longitudinais dorsais, ou DLMs, estão localizados ao longo do plano mediano do tórax acima do intestino e vão de anterior para posterior. Segundo, os músculos ventral dorsal, ou DVMs, vão da parte superior até a parte inferior do tórax e são flanqueados pelo TDT, ou músculo de salto. Ambos os grupos musculares são ligados à cutícula.
Cerca de 48 horas após a formação do puparium, ou APF, os IFMs maduros podem ser identificados visualmente com um microscópio de dissecção simples. No protocolo de exemplo, coletaremos IFMs de pupae com mais de 48 horas de APF para análise de alto rendimento.
- Para dissecção IFM após 48 horas de APF, use um pincel levemente molhado para transferir o pupae encenado para uma tira de fita adesiva de dois lados montada em um slide de microscópio. Oriente a pupae em uma linha, lado ventral para baixo, e anterior em direção ao fundo do slide. Quando todas as pupas tiverem sido colocadas, use fórceps para provocar e abrir a primeira caixa pupal acima dos espigões anteriores, e deslize suavemente um par de fórceps dorsalmente em direção ao posterior, cortando a caixa de pupal à medida que as fórceps se movem.
Liberte a pupa da caixa aberta, e transfira imediatamente a pupa para uma gota de PBS em um segundo slide de microscópio. Quando todas as pupas forem liberadas, use uma tesoura fina para cortar o abdômen da pupae do tórax e empurrar os abdômens para uma pilha separada.
Adicione uma gota de PBS resfriado fresco aos tóraxs restantes antes de usar a tesoura para cortar da cabeça ao longo do eixo longitudinal do corpo em um único movimento para dividir o tórax ao meio. Quando todas as pupas tiverem sido dissecadas, use o número cinco fórceps para selecionar uma das hemisections e insira suavemente as pontas de um fórceps acima e abaixo do meio dos IFMs.
Segurando o primeiro par de fórceps parados, use uma tesoura fina para cortar uma extremidade do IFM longe da cutícula e dos tendões antes de girar a pupa 180 graus para permitir que a outra extremidade do IFM seja cortada livre da cutícula e dos tendões. Use fórceps para transferir o feixe IFM do tórax para a borda da bolha PBS usando tensão de água para manter o feixe no lugar.
Em seguida, empurre a carcaça para o lado oposto do slide e disseca o resto dos IFMs da mesma maneira. Quando todos os IFMs tiverem sido coletados, use o número cinco fórceps para remover qualquer músculo de salto ou fragmentos de cutícula que possam ter encontrado seu caminho para as amostras. Em seguida, use a tensão da água para capturar suavemente os IFMs dissecados entre um par de fórceps e colocar os IFMs em um tubo de microcentrifuge de 1,5 mililitro contendo 250 microliters de PBS refrigerados.
