Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- نقل غسلها C. هlegans في السائل على شريحة زجاجية المغلفة سابقا مع بولي ليسين، مركب من شأنه أن يساعد البشرة دودة التمسك السطح الزجاجي. اضغط بلطف شريحة زجاجية أخرى مباشرة إلى أسفل مع حافة معلقة الشريحة السفلية.
المعدن هو موصل درجة حرارة فعالة ضمان سطح كتلة الباردة بما فيه الكفاية لتجميد البشرة الدودة بسرعة إلى كل من السطوح الزجاجية. مرة واحدة المجمدة، وفصل بسرعة الشرائح الزجاجية لسحب بعيدا أو الكراك فتح البشرة دودة. المضي قدما في تثبيت الأنسجة وتلطيخ وتعطيل البشرة نفاذية منخفضة يسمح المثبتات الكيميائية والأجسام المضادة تلطيخ للوصول إلى أنسجة الدودة الداخلية.
- أولا، إعداد شريحة لإصلاح الديدان.
بعد ذلك ، ضع كتلة معدنية مسطحة في حاوية مليئة بالنيتروجين السائل. اغسل اللوحات بمحلول M9 ونقل حوالي 10 ميكرولترات من M9 تحتوي على الديدان.
مرة واحدة يتم نقل الديدان، وإسقاط بلطف الممرات المتقاطعة coverslip عليها بحيث يغطي يتدلى حافة واحدة.
الآن، على الفور نقل الشريحة إلى كتلة معدنية في النيتروجين السائل والسماح لها تجميد. بعد خمس دقائق، نفض الغبار قبالة coverslip باستخدام حافة معلقة.
بعد ذلك ، اغمر الشريحة في جرة كوبلين زجاجية مملوءة بالميثانول عند ناقص 20 درجة مئوية.
