Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.

Freeze-Cracking af Nematoder

 
Click here for the English version

Freeze-Cracking af Nematoder: En metode til at udsætte interiør orm væv til farvning

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Overførsel vasket C. eleganer i væske et glas dias tidligere belagt med poly-lysin, en forbindelse, der vil hjælpe orm neglebånd holde sig til glasoverfladen. Tryk forsigtigt et andet glas dias lige ned med en kant overhængende den nederste dias. At immobilisere orme uden skader, komprimere dyrene undgå laterale bevægelser. Derefter placere glasrutschebaner med klemt orme en metalblok inde i en isoleret laboratoriebeholder fyldt med et frysemiddel, såsom flydende nitrogen eller tøris.

Metal er en effektiv temperaturleder, der sikrer, at blokoverfladen er kold nok til hurtigt at fryse ormens neglebånd til begge glasoverflader. Når frosset, hurtigt adskille glasset dias til at trække fra hinanden eller knæk åbne ormen neglebånd. Fortsæt med væv fiksering og farvning som afbrydelse af den lave permeabilitet kutikula giver kemiske fikseringsmidler og farvning antistoffer at få adgang til den indvendige orm væv. I den følgende protokol, vil vi se en detaljeret demonstration af fryse-krakning teknik og væv fiksering.

- Først forberede et dias til at fastsætte orme. Pipette 30 mikroliter af poly-L-lysin et dias, ennd derefter indstille en anden dias den anden og gniddem sammen for at sprede opløsningen jævntbegge. Nu skal du skrælle de to dias og lad dem lufttørre i 30 minutter. 

Placer derefter en flad metalblok i en beholder fyldt med flydende nitrogen. Vask pladerne med M9-opløsning og overfør ca. 10 mikroliter M9, der indeholder ormene.

Når ormene er overført, forsigtigt slippe en coverslip crossways dem, således at coverslip udhæng en kant. Derefter forsigtigt trykke på coverslip uden at gøre nogen laterale bevægelser.

Overfør nu straks rutsjebanen til metalblokken i flydende nitrogen og lad den fryse. Efter fem minutter skal du svirpe dækslet af ved hjælp af den overhængende kant. Gør dette hurtigt for at den rigtige revne i neglebåndet.

Dernæst nedsænke dias i en methanol-fyldt glas Coplin krukke minus 20 grader Celsius. Efter fem minutter, overføre dias til en acetone-fyldt glas Coplin krukke i yderligere fem minutter ved samme temperatur.

Tags

Tom værdi Problem
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter