Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- העברה שטף C. elegans בנוזל על שקופית זכוכית מצופה בעבר עם פולי ליצין, תרכובת שתסייע לתולעים להידבק למשטח הזכוכית.
מתכת היא מוליך טמפרטורה יעיל המבטיח שמשטח הבלוק קר מספיק כדי להקפיא במהירות את הקוטיקלים של התולעת לשני משטחי הזכוכית. לאחר ההקפאה, הפרד במהירות את מגלשות הזכוכית כדי לפרק או לפצח את קוטיקל התולעת.
- ראשית, להכין שקופית כדי לתקן את התולעים. פיפטה 30 microliters של פולי-L-ליצין על שקופית,nd אז, להגדיר שקופית שנייה על השני ולשפשףאותם יחד כדי להפיץ את הפתרון באופן שווה על שניהם. עכשיו, לקלף לגזרים את שתי שקופיות ולתת להם אוויר יבש במשך 30 דקות.
לאחר מכן, הנח בלוק מתכת שטוח לתוך מיכל מלא חנקן נוזלי.
לאחר שהתולעים מועברות, זרוק בעדינות כיסוי חוצה עליהם כך שהכיסוי מעל קצה אחד. לאחר מכן, לחץ בעדינות על הכיסוי מבלי לבצע תנועות רוחביות.
עכשיו, מיד להעביר את השקופית לגוש מתכת חנקן נוזלי ולתת לו לקפוא. לאחר חמש דקות, להעיף את הכיסוי באמצעות הקצה תלוי.
לאחר מכן, לטבול את השקופית בצנצנת קופלין זכוכית מלא מתנול במינוס 20 מעלות צלזיוס. לאחר חמש דקות, להעביר את השקופית לצנצנת קופלין זכוכית מלא אצטון במשך חמש דקות נוספות באותה טמפרטורה. השקופיות ניתן מוכתם ישירות או מאוחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס.
