Fryssprickning av nematoder: En metod för att exponera inre maskvävnader för färgning

- Överför tvättad C. elegans i vätska på en glasrutschbana som tidigare var belagd med polylysin, en förening som hjälper maskskurar att hålla fast vid glasytan. Tryck försiktigt på en annan glasrutschbana rakt ner med en kant som hänger över den nedre bilden.

Metall är en effektiv temperaturledare som säkerställer att blockytan är tillräckligt kall för att snabbt frysa maskens nagelband till båda glasytorna.

- Förbered först en rutschkana för att fixa maskarna. Pipett 30 mikroliter poly-L-lysin på en rutschkana, en nd sedan, ställ en andra bild på den andra och gnuggadem tillsammans för att sprida lösningen jämnt på båda. Nu skalar du isär de två bilderna och låt dem lufttorka i 30 minuter. 

Placera sedan ett platt metallblock i en behållare fylld med flytande kväve. Tvätta plattorna med M9-lösning och överför cirka 10 mikroliter M9 som innehåller maskarna. Alternativt plocka maskarna och lägg till M9 i bilden.

När maskarna har överförts, släpp försiktigt ett locklip crossways på dem så att täcket överhänger en kant. Tryck sedan försiktigt på täcket utan att göra några laterala rörelser.

Överför nu omedelbart rutschkanan till metallblocket i flytande kväve och låt den frysa. Efter fem minuter snärtar du av täcket med den överhängande kanten.

Sänk sedan ner rutschkanan i en metanolfylld Coplinburk i glas vid minus 20 grader Celsius.