Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Plaats eerst een microscoopschuif tussen twee andere dia's met tape. Deze bieden ondersteuning en afstandhouders voor de voorbereiding van de agarose pad. Plaats vervolgens een druppel gesmolten agarose op de dia. Druk er onmiddellijk op met een andere dia.
Nadat de agarose stolt, scheidt u de dia's zorgvuldig zodat de agarose op één dia blijft zitten. Gebruik altijd vers gemaakte pads, omdat uitgedroogde pads de dieren kunnen uitdrogen. Zorg ervoor dat er geen scheuren of bubbels zijn, wat de integriteit van de pad kan verstoren.
Voeg vervolgens een druppel verdovingsmiddel toe aan het padcentrum en breng er 10 tot 15 dieren naar toe, waardoor er zo min mogelijk bacteriën bij komen. Overtollige bacteriën kunnen de beeldvorming verstoren. Als de verdovingsoplossing uitdroogt, voeg dan een tweede druppel toe aan de dieren.
Plaats voorzichtig een afdeklip over de pad. Vermijd het vormen van bubbels of het plaatsen van te veel druk om schade aan de dieren te voorkomen. Label ten slotte de glijbaan, die klaar is voor beeldvorming.
- Begin met het voorbereiden van dia's voor beeldvorming. Plaats een druppel gesmolten agarose op een microscoopschuif en druk de druppel onmiddellijk naar beneden met een andere microscoopschuif die de agarose voorzichtig afvlakt Laat de agarose een minuut drogen.
Scheid vervolgens voorzichtig de twee dia's en laat het gestolde kussen op een van de dia's liggen. Plaats de dia op het microscoopstadium en voeg een druppel verdoving van 5 tot 10 microliter toe aan het midden van het agraspad.
Gebruik een warmte gesteriliseerde plectrum om snel 10 tot 15 dieren van de bouillonplaat naar de verdovingsdruppel over te brengen voordat de oplossing uitdroogt. Breng vervolgens een afdeklip aan door deze net boven het agarosepad te plaatsen en het voorzichtig naar beneden te laten vallen.
