Encyclopedia of Experiments: Biology
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- माइक्रोस्कोप स्लाइड पर बफर समाधान की बूंद के साथ शुरू करें और बरकरार कीड़े को बूंद-बूंद में स्थानांतरित करें। एक बार कीड़े होने के बाद, एक लिंट-फ्री ऊतक का उपयोग कर के सोख लें और बफर को हटा दें। 90% इथेनॉल के साथ नमूनों को कई बार स्नान करके नमूने को ठीक करें, जिससे यह प्रत्येक आवेदन के बाद वाष्पित हो जाए।
एक बार जब इथेनॉल अंतिम कुल्ला के बाद सुखाया जाता है, तो नमूने में न्यूक्लिक एसिड डाई, डीएपीआई युक्त समाधान जोड़ें। DAPI डीएनए के मामूली नाली में एडेनिन और थाइमाइन ठिकानों को तरजीह देता है । जब बंधे, DAPI डीएनए परिसर यूवी प्रकाश अवशोषित और दिखाई नीली रोशनी उत्सर्जित करता है ।
अगले नमूने के शेल्फ जीवन का विस्तार करने के लिए एक विरोधी फीका परिरक्षक जोड़ें । एक कवर स्लिप लगाएं और इसे स्लाइड पर सील करें। फिर दापी निकायों की कल्पना करने के लिए नीले फिल्टर के साथ फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करें, जो कोशिका और उसके चक्र की स्थिति के आधार पर एकल गुणसूत्रों, बहन गुणक जोड़े या पूरे नाभिक का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं । इस प्रयोग में, हम ऊसाइट्स में DAPI दाग बहन गुणक जोड़े की गिनती करेंगे, Caenhabd के टेट्रानॉइड जोड़े की पहचान करने के लिए
- टेट्राप्लॉयड उपभेदों में 12 गुणसूत्र जोड़े होते हैं, जिन्हें अनफाइलाइज्ड ओसाइट्स में डीएपीआई दाग निकायों की गिनती करके मान्य किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, एम9 बफर के पांच से दस माइक्रोलीटर को एक स्लाइड पर छोड़ दें और छह से 10 ख्यात टेट्राप्लॉइड को ड्रॉप में स्थानांतरित करें। एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, एम9 के अधिकांश को लिन्ट फ्री क्लीनिंग ऊतक में सावधानी से भिगोकर रखें।
इसके बाद 90% इथेनॉल के 10 माइक्रोलीटर को कीड़े पर गिराएं और इथेनॉल को पूरी तरह से वाष्पित होते देखते हैं। वाष्पीकरण खत्म होते ही इथेनॉल को जोड़ने और इसे वाष्पित होने की प्रक्रिया दोहराएं। कुल मिलाकर चार अनुप्रयोगों में 10 माइक्रोलीटर जोड़ें। पिछली बूंद वाष्पित होने के बाद, दो नैनोग्राम प्रति माइक्रोलीटर, या इसी तरह के दाग पर डीएपीआई के छह माइक्रोलीटर जोड़ें।
स्लाइड्स के लॉन्ग टर्म स्टोरेज के लिए कीड़े को व्यावसायिक रूप से उपलब्ध या घर के बने एंटी फीके में माउंट करें। इसके बाद नेल पॉलिश के साथ एक कवरलिप डालकर किनारों को सील कर दें। नेल पॉलिश सूखने के बाद स्लाइड्स को बनाया जा सकता है फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप और 100 एक्स आवर्धन का इस्तेमाल करें।
सबसे पहले, सबसे परिपक्व अनिषेरित ओसाइट ढूंढें, जो तुरंत शुक्राणुओं से सटा हुआ है, और अभी तक शुक्राणु या गर्भाशय में प्रवेश नहीं कर पाया है। यहां दापी निकाय संभवतः एकल गुणसूत्र जोड़े हैं। इसके बाद, ओसाइट के नाभिक पर ध्यान केंद्रित करें और माइक्रोस्कोप के ठीक फोकस का उपयोग करें, इसे धीरे-धीरे स्कैन करने के लिए, ऊपर से नीचे तक, जबकि DAPI निकायों की गिनती। फिर एक ही नाभिक में DAPI निकायों को ऊपर से ऊपर से ध्यान केंद्रित करके ब्योरा ।
जंगली प्रकार के ओसाइट्स में औसतन छह दापी निकाय होते हैं। 12 डीएपीआई निकायों की उपस्थिति इंगित करती है कि इस तनाव में जानवर या तो आंशिक या पूर्ण टेट्राप्लॉइड होते हैं। कम से कम 10 जानवरों का विश्लेषण प्रति तनाव होता है। अक्सर गुणसूत्र जोड़े बहुत करीब होंगे या छू लेंगे इसलिए डीएपीआई निकायों की संख्या अक्सर गुणसूत्र जोड़े की वास्तविक संख्या से छोटी होती है।
