Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Börja med en droppe buffertlösning på en mikroskopbild och överför intakta maskar till droppen.
När etanolen har avdunstat efter den slutliga sköljningen, tillsätt en lösning som innehåller nukleinsyrafärgämnet, DAPI, till provet.
Tillsätt sedan ett konserveringsmedel mot blekning för att förlänga provet. Applicera ett täckspill och försegla det på bilden. Använd sedan ett fluorescerande mikroskop med ett blått filter för att visualisera DAPI-kroppar, som beroende på cellen och dess cykelstatus kan representera enstaka kromosomer, systerkromatidpar eller hela atomkärnor.
- Tetraploida stammar har 12 kromosompar, som kan valideras genom att räkna DAPI-färgade kroppar i obefruktade oocyter. För att göra det, släpp fem till tio mikroliter M9-buffert på en glidning och överför sex till 10 förmodade tetraploider i droppen.
Släpp sedan 10 mikroliter 90% etanol på maskarna och se etanolen avdunsta helt. Så snart avdunstningen är klar, upprepa processen att tillsätta etanol och se den avdunsta. Totalt tillsätt 10 mikroliter i fyra applikationer.
För långtidslagring av diabilderna, montera maskarna i en kommersiellt tillgänglig eller hemlagad anti-fade. Lägg sedan till ett täckglas och försegla kanterna med nagellack.
För det första, hitta den mest mogna obefruktade oocyten, som ligger omedelbart intill spermatheca, och ännu inte har kommit in i vare sig spermatheca eller livmodern. DAPI-kropparna här är förmodligen enstaka kromosompar.
Vilda typoocyter har sex DAPI-kroppar i genomsnitt. Förekomst av 12 DAPI-kroppar indikerar att djuren i denna stam antingen är partiella eller kompletta tetraploider. Analysera minst 10 djur per stam. Ofta kommer kromosompar att vara mycket nära eller röra så antalet DAPI-kroppar är ofta mindre än det faktiska antalet kromosompar.
