水泳誘発性麻痺(SWIP)アッセイ:C.エレガンスにおけるドーパミン媒介性ロコモーションを定量化する方法

- 水泳induced麻痺、またはSWIPアッセイを行うために、L4上演されたC.エレガンス幼虫を液体で満たされたガラススポットプレートに移します。

ドーパミン媒介性水泳を評価するには、C字型の身体曲げおよびスラッシング行動を特徴とするワームの動きを記録する。通常、ドーパミン作動性ニューロンはシナプス裂にドーパミンを放出し、受け入れ細胞上のドーパミン受容体に結合する。

メッセージが渡されると,ドーパミンは受容体から解放されます,そして、非結合神経伝達物質は、特殊なトランスポータータンパク質を介してドーパミン作動性ニューロンによって取り上げ、再利用することができます.

ドーパミンシグナル伝達の変化を伴う幼虫では、ドーパミントランスポーターの突然変異を失活させたり、ドーパミンの放出を増加させる薬物治療を行ったりすると、シナプス裂にドーパミンが蓄積する。

プロトコルの例では、アンフェタミンで処理されたC.エレガンスにおける手動および自動SWIPアッセイの詳細なデモンストレーションが見られる。

- SWIPの手動評価については、0.5ミリモルアンフェタミンの有無にかかわらず40マイクロリットルの制御溶液をガラススポットプレートに追加します。

タイマーを起動して井戸に放出されたワームの数を記録し、SWIPを示すワームの数を1分のマークで観察し、合計10分間記録します。

手順の最後に、生データをスプレッドシートにコピーし、1分ごとに麻痺したワームの数をアッセイ全体でテストされたワームの総数で割り、100を掛けることで麻痺したワームの割合を計算します。

対照群とアンフェタミン処理群と治療時間の統計分析を行うことができます。

水泳誘発麻痺の自動分析のために、カメラ、ワームトラッカーソフトウェア、および追跡ソフトウェア分析を実行するためのスクリプトを設定します。

次に、一度に1つのワームの水泳ビデオを記録し、ワームトラッカーソフトウェアを使用してボディベンドの頻度を計算します。