Плавание индуцированных паралич (SWIP) Анализ: Метод количественно допамина опосредованное движение в C. elegans

- Для выполнения плавания я nduced паралич, или SWIP анализ, передача L4 поставил C. elegans личинок на стеклянное пятно пластины заполнены жидкостью. Определить L4 гермафродитов по присутствию развивающихся вульвы. Полумесяцаформы патч в середине тела, и кнутом, как хвост.

Для оценки допамина опосредованное плавание, запись движения червя характеризуется C-образный изгиб тела и обмолота поведения. Обычно, дофаминергические нейроны релиз допамина в синаптической расщелины, которая, в свою очередь, связывает рецепторы допамина на принимающей клетке.

После того, как сообщение передается, допамин высвобождается из рецепторов, и неограниченные нейротрансмиттеры могут быть приняты дофаминергический нейрон через специализированные белки транспортера и повторно.

У личинок с измененной сигнализацией допамина, вызванной инактивирующими мутациями в транспортере допамина или медикаментозном лечении, которые увеличивают высвобождение дофамина, допамин накапливается в синаптической расщелине. Избыток допамина над стимулирует рецепторы допамина, мешающие двигательной программе и оставляющие личинки парализованными.

В примере протокола мы увидим подробные демонстрации ручных и автоматизированных анализов SWIP в C. elegans, обработанных амфетамином.

- Для ручной оценки SWIP, добавить 40 микролитров раствора управления с или без 0,5-миллимолярный амфетамин в стеклянную тарелку месте. Под стереоскоп, выбрать от 8 до 10 конце L4 этапе червей с ресниц забрать, и погрузить забрать в колодец, содержащий раствор, пока черви сойти забрать и плавать в раствор.

Запустите таймер. Обратите внимание на количество червей, выпущенных в колодец, и наблюдайте и записыв количество червей, выставляют SWIP на каждую минуту знака в общей сложности 10 минут.

В конце процедуры скопировать необработанные данные в электронную таблицу и рассчитать процент червей парализована путем деления числа червей парализована в каждую минуту на общее количество червей испытания на протяжении всего анализа и умножения на 100. Копировать процентные значения в любой график и статистическое программное обеспечение и график данных с процентными значениями SWIP на оси и времени на X-оси с использованием XY график формата.

Статистический анализ среди контрольно-лечебных групп и групп, обработанных амфетамином, и время лечения могут быть выполнены.

Для автоматизированного анализа паралича индуцированных плаванием, настроить камеру, программное обеспечение червя трекер, и сценарий для запуска анализа программного обеспечения отслеживания. И использовать ресницы забрать разместить один поздней стадии L4 червя в стеклянной пластине месте, как показано ранее.

Затем записывают плавательные видео одного червя за один раз и используют программное обеспечение для отслеживания червей для расчета частоты изгибов тела. После сценария предоставляется программное обеспечение для отслеживания для получения частоты обмолота червя и для создания тепловых карт из данных обмолота червя.